人乳头瘤状病毒(HPV)感染及抑制癌基因p16突变在食管鳞癌中的研究.pdfVIP

中文摘要 人乳头瘤状病毒(HPV)感染与抑癌基因p16突变在 食管鳞癌中的研究 摘 要 背景：食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，死亡率较高。发病率有 明显的地区特点，河北省中南部，太行山地域及河南省北部是本病世界 发病率最高的地区，其组织类型主要为食管鳞癌(95％)。本病早期症状 不明显，易被忽视，早期治疗预后较好，中晚期患者占大多数，症状明 显，预后较差，因此针对此病的病因学研究成为预防、早期诊断、治疗 的关键。人乳头瘤病毒(HPV)自20世纪初被发现以来，其与多种肿瘤 的关系陆续得到确认。以宫颈癌为例，现已开发出针对HPV感染的相关 疫苗，这成为宫颈癌预防上的一座里程碑。1982年S)，uanen首先提出 HPV感染与食管癌的发生有关，1987年我国学者周健等首次在国内进行 食管鳞癌与HPV感染关系的研究，之后困内外学者针对HPV感染和食 管癌的关系进行了大量研究，发现在一些地区，HPV感染与食管癌有 关，在另一些地区，二者之间则无关，甚至同一地区，不同研究方法和 研究人员都会得出相反的结论，因此，HPV感染与食管鳞癌之间的关系 6基因是近年来发现的一种新型抑癌基因，是第一种 仍未得到确定。pl 能作用于细胞周期的抑癌基因，其在肿瘤发生发展中的作用逐渐受到重 1 6基因 视。P6基因在肿瘤发展过程巾发生改变，究竟是何原因导致pl 发!qj变异，HPV感染是否是导致食管鳞癌中p16基因变异的原因仍未得 到证实。 目的：本研究旨在应用聚合酶链反应技术(PCR)联合DNA探针技 术对河北省中南部地区食管鳞癌患者HPV感染情况进行研究，以明确二 者之间的关系，为进一步研制HPV疫苗提供依据。本研究应用单链构象 6基因第二外显子突变进行初筛，以明确 多态性(SSCP)技术对标本pl 其在食管癌发病过程中的变化以及HPV感染与p16基因突变的关系。 方法：对47名河北省中南部地区食管鳞癌患者以及37名河北省石 DNAmini 家庄+市健康志愿者食管组织进行取材，采用QIAamp kit试剂 ARRAYHPV 禽提取组织DNA，应用LINEAR Test试荆盒对 Genotyping 中文摘要 内对照，检测DNA质量。除试剂盒阳性、阴性对照外，同时采用HPV E6基因 阳性宫颈癌组织做阳性对照，DEPC水做阴性对照，并采用HPV 引物对标本DNAHPV感染情况进行复检，排除由于实验操作、污染、 技术、设计等问题造成的假阴性及假阳性结果。HPV感染检测完成之 引物分为三段进行设计)，PCR产物加入变性液后高温变性5分钟，然 后立即骤冷保持DNA单链状态，进行4。C恒温非变性聚丙烯酰胺凝胶电 13．0及SAS8．0完 泳，电泳结束后银染观察结果。统计学分析采用SPSS 成。 结果： 1食管鳞癌患者中HPV感染率O％，正常对照组HPV感染率为O％，试 剂盒阳性对照呈现i5订性，宫颈癌标本HPV感染呈现阳性，食管癌患者中 HPV E6基因为O％，宫颈癌标本HPV E6基因为O％，正常对照组HPV E6基因为附陛，此结果和试剂盒检测结果一致。 6第二外显子基因缺失率为O％，基因突变率为 2食管鳞癌患者中pl 44．7％。正常对照组p16第二外显子基因缺失率为0％，基因突变率为 o％。以病理分期为标记分组，采用k个