人工蚕丝韧带复合骨髓间充质干细胞修复前交叉韧带损伤的实验探究.pdfVIP

目 录 中文摘要 1 英文摘要 3 刖 舌 1 材料与方法 讨论 25 结论 33 附图 34 参考文献……………………………………………………………………………………·41 宝亲主苤…………………………………………………………………………………………………-45 致谢 ………51 攻读学位期间发表的学术论文………………………………………………………………··52 原创性岁旨明………………………………………一OOIOI…………………………………………………53 愀删 人工蚕丝韧带复合骨髓间充质干细胞修复前 交叉韧带损伤的实验研究 研究生：杨继祥 专业：骨外科学 导师：贾庆卫副教授 中文摘要 目的 人工蚕丝韧带(Artificial 性，没有细胞毒性，并不引起炎性反应，在组织工程己被广泛应用。蚕丝脱胶后，经 多种方法增大人工蚕丝韧带的孔隙率，提高其与外周事物接触的表面积，进而增加骨 髓间充质干细胞(BMSCs)在蚕丝韧带上的粘附率。通过一定浓度骨髓间充质干细 胞在人工蚕丝蚕丝韧带上贴附生长，制成复合生物材料，替代新西兰大白兔的前交叉 韧带(ACL)，在膝关节微环境和动力作用下，观察复合材料的转变，并与正常韧带 做对比。为人工肌腱和韧带等组织工程材料的制作提供一定的可行性。 I．实验流程 1．1制作人工蚕丝韧带，用胰酶或碳酸钠进行脱胶，然后与I型胶原蛋白复合， 珀酰亚胺)作为交联试剂进行胶原的交联，再次冷冻干燥，环氧乙烷灭菌备用。 1．2选取约一周左右新西兰小白兔，取其骨髓间充质干细胞，传代培养并行流式 细胞仪检测细胞种类。取第四代细胞，与备用的人工蚕丝韧带复合7天，形成复合材 料。 1．3封闭群养新西兰大白兔36只，随机分为3组(空白组，实验组和对照组)， 每组12只。在相同条件下分别去除其前交叉韧带，保留残端。在实验组中，用复合 材料重建ACL。 2．观察指标 2．1不同预定时间各组分别随机处死4只动物，观察复合材料组织学、病理学形 态变化及骨与复合材料连接接口的组织结构。 2．2不同预定时间随机行实验动物的影像学和生物力学检察。 3．统计学分析 采用SPSS软件，行配对t检验、单样本t检验、2x4析因分析，统计分析。 结果 1．人工蚕丝韧带的孔除率 蚕丝韧带表面因为丝胶的存在，把丝素纤维紧紧包裹住粘合在一起组成完整的蚕 丝，使得丝素表面粗糙不平，但能够看到单根的丝素纤维；脱胶后，丝素表面因丝胶 的去除而很光滑，可见一单根的丝素纤维。脱胶后人工蚕丝韧带与胶原复合，在其表 面形成了一层胶原层，结构很不均匀，表面积增大，使得蚕丝韧带表面变得粗糙不平， 孔隙率提高，促进了BMSCs的贴附。 2．骨髓间充质干细胞的培养 一周大小新西兰小白兔处死后，立即取其四肢干骺端髓腔细胞培养。48小时后初 次换液，用PBS缓冲液轻轻冲洗，去除杂细胞，净化B