现代测试技术原理和应用.docVIP

分子荧光光谱 定性分析依据 荧光光谱是激发态分子从第一激发态的最低振动能级跃迁回到基态中各个不同能级时，通过发射光子方式释放能量，其能量的大小和第一激发态能级和基态各能级差有关；荧光光谱谱线的形状取决于分子基态中能级分布情况。因此不同分子的荧光谱图不同。 定量分析依据（激发波长一定的条件下）荧光强度（F）和溶液中吸收光的强度（Ia）及荧光物质的荧光效率（(）成正比：F=( Ia 在极稀溶液（(lc?0.05）时，，荧光强度（F）和溶液中荧光物质的浓度（c）成正比：F=kc 应用 有机物质的定性和定量测定； 生物分子的检测； 生物大分子催化、折叠等动力学过程 DNA分析； DNA含量分析； DNA碱基序列分析； 在体基因检测；毛细管电泳柱后的高效检测器 — 激光诱导荧光检测 荧光：第一激发单重态的最低振动能级→基态； 磷光：第一激发三重态的最低振动能级→基态； 2.分子磷光光谱 发光机理 分子吸收激发光源的光能后，被激发至激发态，由于在激发过程中分子中的电子自旋发生变化，从基态单重态激发至激发态的三重态，或从基态 — 单重态激发至激发态 — 单重态，然后通过体系间跨越跃迁到三重态，由三重态通过发射光子释放能量跃迁回到基态 — 单重态。 应用 生物分析； 药物分析； 生物反应动力学过程研究（磷光免疫分析 etc.） 3.化学发光技术（Chemliuminescence CL) 基本原理 反应物或反应产物吸收了化学反应时产生的化学能，使其分子或原子由基态激发至激发态，而再跃迁回到基态时发出一定波长的光称 化学发光。 发光机理 A ＋ B === C* ＋ D C* C ＋ h? A ＋ B === C* ＋ D C* ＋ F === F* ＋ C F* F ＋ h? 应用 无机物的分析； 有机物的分析； 生物活性物质的分析；生物活性氧的分析 免役发光分析； 核酸杂交分析； 微全分析系统中的应用 4.电化学发光技术(ECL) 原理 ECL是利用电极原位产生试剂，这些试剂在溶剂中反应，完成较高能量的电子转移而生成激发态的分子，不稳定的激发态分子回到基态过程中以光辐射形式释放能量。 向电解施加正负脉冲 正电位时，分子被氧化：A A+ + e- 负电位时，分子被还原： A + e- A- A+ + A- 2A* A* A + h? ECL的应用 电致化学发光在化学修饰电极、生物传感器及核酸探针中的应用。 电致化学发光在免疫分析中的应用。 近红外电致化学发光。 光声光谱 光声光谱基本原理 光声光谱指物质吸收光源或电子辐射后激发至激发态，然后经过无辐射跃迁（放热）回到初始状态—光能转变成热能的过程—进而测量。 光声技术是测量样品内部热能，因而它即是量热技术，也是光谱技术。 应用 无机绝缘体（绝缘体、半导体、金属材料等不透光或易反射的物体。） 固体有机物（有机染料和有机半导体等吸收系数很大，光学上不透明的材料。） 液晶 （液晶的固态，近晶态和向列态等对光有强烈散射的物体。） 表面研究（光声光谱技术可有效地用于研究金属、半导体甚至绝缘体表面上吸收的各种分子和化合物，如TLC分离后各物质的鉴定等）。 生物医学 生物大分子的真空紫外光声光谱和微量测定，通过同步加速器辐射产生的真空紫外光束、气体传声器检测DNA溶菌酶、酵母细胞、胸腺嘧啶等多种生物分子、及农业产 品的质量鉴定。 细胞学研究 鉴别细菌的状态，即通过光声光谱鉴别和区分不同的细菌状态，测定处于各种发展阶段的细菌。植物光合作用的研究； 白血病的病况和早期诊断探讨 6旋光与圆二色性光谱 圆二色性（circular dichroosim,简称CD）和旋光色散（Optical rotatory dispersion,简称 ORD）是研究分子结构不对称的方法，可用来检测生物大分子样品在溶液状态下的构象，它能和X射线衍射法有很好的互补性。 X射线衍射法能够在晶体状态下了解分子结构，提供最详细的资料，