接种环.PPTVIP

实 验 七 微生物的分离、培养和菌种保藏 微生物的分离、培养和菌种保藏 目的要求 实验材料 试验程序 思考题 目的要求 初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏的基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。 实验材料 样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养基、马铃薯蔗糖培养基（10mL装）。 无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、胶水、水浴锅。 试剂：5000U/mL链霉素液 0.5％重铬酸钾液 实 验 程 序 微生物的分离 微生物的接种方法（示范） 微生物培养中的氧气条件 微生物的菌种保藏方法 四大类微生物菌落形态的比较和识别 实验程序1 （微生物的分离） 用稀释平板法（又名混菌法）从土壤中分离真菌。 用平板涂抹法分离土壤中的放线菌（土壤稀释液制备同上）。 用平板划线法分离土壤中的细菌（土壤稀释液的制备同上）。 实验程序2 （微生物的分离—稀释平板法） 制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤5g，放入45mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－1的土壤悬液。 2. 另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10－2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 10－5 10－6土壤稀释液。 在土壤稀释过程中，应用一支吸管由浓到稀，稀释到底，稀释方法见图-1。 实验程序3 （微生物的分离—稀释平板法） 实验程序4 （微生物的分离—稀释平板法） 涂平板：每组取培养皿2付，即每个同学做一只。 1.先在无菌培养皿底部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 2.另取一吸管，以无菌操作法吸取10－4或10－5土壤稀释液1mL，加在无菌培养皿的一边，在皿的另一边加入2滴5000U/mL的链霉素液。此时两液严防相混。 3.取已熔化的在水浴锅中保温500C左右的马铃薯蔗糖培养基2管，分别倒入上述培养皿中（见图－2），轻轻转动培养皿，使菌液、链霉素液、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于28～300C恒温培养5～6d。观察真菌菌落形态以及计数菌落。并计算出每g土壤中真菌的数量。即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。 挑取单个菌落，接种到斜面培养基上作纯化和性能测定，若不纯，需要继续分离。 实验程序5 （微生物的分离—稀释平板法） 实验程序6 （微生物的分离—平板涂抹法） 每组取无菌培养皿2付（每个同学做一只）。在皿底贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 以无菌操作法先在培养皿中加入0.5％重铬酸钾溶液2滴，取已熔化的淀粉琼脂培养基2管，分别倒入培养皿，使培养基与重铬酸钾充分混匀，铺平，制成平板。 凝固后，另取一支吸管吸取10－3或10－4的土壤稀释液 0.2mL放在平板上。 用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于28～300C条件下培养6～7d，观察放线菌菌落形态及计数菌落