雌、孕激素对子宫内膜异位症裸鼠模型中MMP-2、TIMP-2和VEGF蛋白表达影响.pdfVIP

引言 引言 子宫内膜异位症(简称内异症，脚s)是指子宫内膜的间质细胞和腺上皮细胞在 宫腔以外的部位异常生长，以痛经、慢性盆腔痛和不孕为主要临床表现，是育龄妇 女常见良性疾病，近年来其发病率呈上升趋势．目前内异症以手术治疗和内分泌药 物治疗为主，但难以根治，治疗后EMs总体的复发率高达加％【1】以上，一直以来困 扰临床治疗。尽管人们经过长期的研究，内异症的发病机制至今尚未完全阐明，存 在多种学说：子宫内膜种植学说、体腔上皮化生学说、淋巴及静脉播散学说、免疫 学说等，其中Sampson[21提出的经血逆流学说已被人们普遍接受。但该学说实际上不 能解释为什么90％的生育期妇女存在经血逆流现象，而只有10％～15％的妇女发病。 近年研究认为，经血逆流仅是喇s发病的诱因，而脱落内膜细胞的生理机制改 变如黏附性、侵袭性增强和血管形成才是引起EXs的主要矛盾【3】。由于酬s具有侵 袭性，能种植、转移和复发，其生物学行为与恶性肿瘤细胞相似，一些肿瘤相关因 子如基质金属蛋白酶(matrix 视。异位的子宫内膜黏附于腹膜及其他结缔组织后进一步种植、生长需要腹膜的细 胞外基质(extracellulax 有成分的内肽酶。在ECM的降解、重塑中起重要作用H。金属蛋白酶组织抑制因子 (tissueinhibitorsof 组织抑制剂，能与m口s发生1：1的结合而抑制其活性，从而调节E伽的合成与降 解。枷Ps／TIMPs比例失调在异位内膜侵袭中的作用是目前研究的热点。I^P-2是m舻s 家族中的重要成员，参与ECM_中多种成分的降解，TIMP-2为删P-2的特异性抑制剂， 可与蛐俨一2非共价结合，抑制删P-2的蛋白水解活性，在维持B明内环境的稳定和 结构完整性中发挥重要作用。另外，种植物的成功种植尚须充足的血液供应，脱落 的子宫内膜碎片返流入盆腹腔，进而成功种植、发生蹦s，与其局部新生血管的形成 有关。研究表明，VEGF是促血管新生的重要因子，通过与血管内皮细胞的特异受体 结合，引起强大的促内皮细胞增殖、促血管生成作用翻，可为子宫内膜的异位生存、 生长提供血供支持，可能在内异症的发生、发展发挥重要作用． 朗s是激素依赖性疾病，子宫内膜及其自分泌、旁分泌过程均受卵巢激素的调 节．本研究通过建立EMs裸鼠模型，采用免疫组化方法检测正常子宫内膜、雌孕激 素干扰下异位内膜的m肛，_2、TIMP一2及VEGF蛋白表达水平，探讨雌、孕激素对内 中的作用。 材料与方法 第一章论文 第一节材料与方法 1．材料 1．1人子宫内膜标本来源 标本取自2006年2月至4月在青医附院因妇科良性非EMs病变(子宫内膜正 常)行子宫切除术的患者。患者年龄41～47岁，月经规律，无内科并发症，术前6 个月内未用过激素类药物。术后病理证实为分泌晚期子宫内膜。 1．2实验动物 克动物实验中心。于我校动物实验中心SPF级条件饲养． 1．3主要仪器 显微镜OLYMPUS 生物组织自动脱水机IS．12F湖北) 病理组织包埋机和包埋冷冻台BMJ．III(常州) 病理组织切片机LEICARM2025(德国)和漂烘处理仪PHY-III(常州) 图像处理系统VIDSA-2l(德国OPTON公司) 电热恒温水浴箱(上海医疗器械七厂) 高速低温台式离心机90-2型(德国Eppendorf公司) 微波炉(广东格兰仕厂) TNIOOB型托盘式扭力天平(上海第二天平仪器厂) 恒温磁力搅拌器、超净工作台、载玻片、盖玻片。 1．4试剂 人上皮膜抗原(眺)单克隆抗体、兔抗人m(P-2多克隆抗体、鼠抗人TIMP-2 单克隆抗体及兔抗人VEGF单克隆抗体——均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 PV-6001、PV-6002(PowerVmion Two-StepHististainingReagent)二步法免疫组 织化学检测试剂盒—一购自北京中杉金桥生物技术有限公司． 有限公司． Benzoate 苯甲酸雌二醇注射液(Estradiol Injection)——上海通用药业