果仁粕蛋白提取和功能特性地.pdfVIP

第一章前言 组合起来则形成第四级结构。 在一个普通的细胞中有几千种蛋白质，每种蛋白质执行特殊的功能。蛋白质对生 物体的作用非常重要。在成人体内大约有六十万亿个细胞，几乎发生在细胞内部的每 一个过程都涉及到一种或者多种蛋白质．即使一种蛋白质不工作也不会引起疾病。蛋 白质具有以下生物功能： (1)酶。几乎细胞体内的所有生物化学反应都需要酶来催化。在不同的生物体 内发现了几千种酶，每种酶催化一种化学反应。从下列事实可看出酶的重要性：很多 化学反应都需要在特殊的pH值、高温、高压和高反应物浓度完成，而我们人体的pH 值呈中性，生活在大气压中，体温是37C，人类不可能通过改变上述条件来加快体 内化学反应过程；火车的燃烧热能量转化率只有8％，而细胞中线粒体内能量的转化 率高达50％。因此，所有的生物体都需要依赖酶的活力。其作用是把底物结合在一起。 稳定其过滤态，改变反应历程，导致生成产物。 (2)传输和贮存蛋白质。有些蛋白质传输和贮存如金属离子、氧气、葡萄糖和 酯类等在生化上非常重要的物质。以血红蛋白为例，这种蛋白质的作用就是传送氧气。 它是由两个n链和两个B链组成。血液经肺部时它与氧气结合；当血液流到体内各器 官时则将其中的氧气释放出来(氧气参与葡萄糖和其它营养成分的氧化反应，产生能 量)，顺便把二氧化碳带回肺部。 (3)运动和结构蛋白质。有些蛋白质使细胞或组织产生收缩，改变形状。例如， 肌动蛋白和肌球蛋白控制骨架周围肌岗的收缩。很多蛋白质用来增强生物体的强度或 起保护作用，如头发、指甲等大多由坚硬和不溶的角蛋白质组成。 (4)防御蛋白质。很多蛋白质用来抵抗外来物的入侵或者防御损伤。如免疫球 蛋白或者抗体能识别、沉淀或者中和入侵细菌和病毒，它们能与外来物结合，或者包 围外来物，使其失活。 (5)调节蛋白质。很多蛋白质能帮助调节细胞活性或者其生理功能，其中很多 是激素。其它的调节蛋白质与脱氧核糖核酸键合在一起，调节酶和核糖核酸的生物生 成。 2 郑州大学硕+学11：)=论文 I．I．2蛋白质提取与纯化技术 以蛋白质的结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物 学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。 蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。 一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或 几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等：二是将混合物置于单一物相中， 通过物理力场的作用使各组分分配于不同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心， 超滤等。由于蛋白质不能溶化，也不能蒸发，所能分配的物象只限于固相和液相，并 在这两相间相互交替进行分离纯化。制备方法可按照分子大小、形状、带电性质及溶 解度等主要因素进行分类。按分子大小和形状分为差速离心、超滤、分子筛及透析等 方法；按溶解度分为盐析、溶剂抽提、分配层析、逆流分配及结晶等方法；按电荷差 异分为电泳、电渗析、等电点沉淀、离子交换层析及吸附层系等：按生物功能专一性 有亲和层析法等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性，防止 酸、碱、高温，剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分 为以下四个阶段：选择材料和预处理，细胞的破碎及分离，提取和纯化，浓细、干燥 和保存。棚 微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料，所选用的材料主要依据实 验目的来确定。对于微生物，应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸 的含量较高，可以获得高产量，以微生物为材料时有两种情况：(I)利用微生物菌体 分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等；(2)利用菌体含有的生化物质，如蛋白质、 核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳，脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同， 其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。对动物组织，必须选择 有效成份含量丰富的脏器组织为原材料，先进行绞碎、脱脂等处理。另外，对预处理 好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存，对于易分解的生物大分子应选用新鲜材 料制各。 1)蛋白质(包括酶)的提取 大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶 于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提