单糖还原糖的测定大全.doc

15.2.2.1??? ?铜还原——直接滴定法 15.2.2.2 ?? ?姆松——华尔格法 (高锰酸钾容量法) 15.2.2.3??? 常量法——氰化盐碘量法 15.2.2.4??? ?夏费—索姆吉法——半微量法 　 15.2.2.1? (Lane-Eynon’s method)［1，2］Top 15.2.2.1.1? 方法原理 样品中的水溶性糖可以用80℃温水浸提，但对含淀粉和菊糖高的样品则须用800mL·L-1-850mL·L-1酒精浸提，其中还原糖可使费林(Fehling)试剂还原生成Cu2O沉淀，而本身被氧化和降解成糖酸。费林试剂是由CuSO4溶液、NaOH和KNaC4H4O6溶液组成。在碱性溶液中，酒石酸盐可与铜盐形成配离子而不致生成氢氧化铜沉淀。其反应如下： Cu2+- + 2(C4H4O6)2-→［Cu(C4H3O6)2］4-2O 在煮沸条件下，用还原糖待测液滴定一定量的费林试剂时，铜的酒石酸配离子被还原糖还原，产生红色Cu2O沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应示意式如下： ? 上述反应是铜还原法测糖的基本原理。 滴定时是以亚甲基蓝为氧化还原指示剂，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为 无色的还原型亚甲基蓝，即达滴定终点。 还原糖与费林试剂反应的完全程度与滴定时条件(如加热强度、温度、时间等)很有关系，故必须严格按照操作规程测定。指示剂也消耗一定量还原糖，所以每次滴定时须按规定加入相同数量的亚甲基蓝。本法适宜于含糖量高的样品(15—50mL糖液中含糖50mg)。 15.2.2.1.2? 主要仪器高速组织捣碎机；电热恒温水浴锅；玻塞滴定管(附弯形尖管，见图15-1) ? 图15-1? 弯形尖管规格及安装图 1.玻塞滴定管? 2.橡皮圈? 3.橡皮管? 4.弯形尖管(管径为5mm) 15.2.2.1.3? 试剂 (1) Soxhlet修正的费林(Fehling)溶液：应用前立刻配制，通过下列费林试剂A和B溶液等体积混合而制得。 ①???? 费林试剂A：溶解CuSO4·5H2O 34.639g于水中，移入500mL容量瓶中，用水定容。 ②???? 费林试剂B：溶解酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)173g和NaOH 50g于少量水中，洗入500mL容量瓶中，用水定容。 (2) 100g·L-1中性醋酸铅溶液：称100g醋酸铅［Pb(CH3COO)2·3H2O］(化学纯)溶于水中，过滤后稀释至1L。 (3) Ba(OH)2饱和溶液：在100mL无CO2水中，加入固体Ba(OH)2·8H2O(化学纯)约6g，用玻棒搅拌，将烧杯盖好过夜，次日滤去未溶物，溶液装在细口瓶中备用。为了防止与空气中CO2接触，应装设碱石灰管及虹吸管。 (4) Na2SO4饱和溶液：称Na2SO4·10H2O(化学纯)165g，溶于1L水中。 (5) 50g·L-1硫酸锌溶液：称取ZnSO4·7H2O(化学纯)50g，加水溶解，并用水稀释至1L。 (6) 850mL·L-1及800mL·L-1乙醇(C2H溶液：取950mL·L-1乙醇(分析纯)85mL，加水稀释至95mL，即为850mL·L-1乙醇溶液。取950mL·L-1乙醇80mL，加水稀释至95mL，即为800mL·L-1乙醇溶液。 (7) 固体草酸钠(Na2C2O4)试剂(分析纯)。 (8) 10g·L-1亚甲基蓝水溶液：称亚甲基蓝1.00g溶于水中，加水稀释至100mL。 (9) 2mg·mL-1葡萄糖标准溶液：称取干燥的葡萄糖(优级纯)0.2000g用少量水溶解后，洗入100mL容量瓶中用水定容。 15.2.2.1.4? 操作步骤 (1) 待测液制备 ①水提取法：清除新鲜水果、蔬菜样品外来污染的杂质，尽可能快地磨细或切碎，混匀，称取样品25.00g—50.00g(含糖约2.5g)，置高速组织捣碎机中，加适量水后捣碎(或置研钵中加少量纯石英砂共同研磨)，然后小心移入250mL容量瓶中，加水至约150mL；或风干已磨细的样品则可称取0.500—5.00g，洗入250mL容量瓶中，亦加水至约150mL。然后加入粉状CaCO3 0.5—1.5g中和样品中的酸度(防止浸提过程中蔗糖水解)，摇动1min，置于80℃水浴中保温浸提0.5h，其间摇动数次以利糖分浸提完全。冷却，滴加100g·L-1中性醋酸铅溶液至产生白色絮状沉淀，充分摇动混合，静置15min，再滴加几滴中性醋酸铅溶液于上部清液中检查是否沉淀完全。如果还有沉淀形成，再摇动，静置，直至不产生白色絮状沉淀为止(约2—5mL)，用水稀释定容。用干滤纸过滤。加入足量草酸钠固体到滤液中，使铅沉淀完全，再用干滤纸过滤，再用固体草酸钠少许加到滤液中，检查铅是否沉淀完全。无铅的滤液待用。 ②乙醇提取法：称取剪碎、混匀的新鲜植株样品(含大