核酸3-4节.ppt

第四节　RNA的结构与功能 RNA与DNA的比较 真核细胞内RNA的种类及功能 一、转运RNA结构与功能 mRNA作为指导合成蛋白质的模板，含量3-5%. 种类多、拷贝少、寿命短、修饰成分少是其特点。 mRNA的主体序列是编码区，在其上游5’侧和下游3’侧都有非编码区。 真核生物mRNA分子两端还有5’帽子和3’尾部结构 真核生物mRNA的结构 帽子结构通常有三种类型： O型：m7G5’ppp5’Np Ⅰ型：m7G5’ppp5’NmpNp Ⅱ型：m7G5’ppp5’N mpNmpNp G：N： m： 在字母左侧表示碱基被甲基化，在右侧表示核糖被甲基化 右上角数字表示甲基化位置，右下角的数字表示甲基数目 U系列核内小RNA（snRNA）也有5‘帽子结构，但它们的帽子是三甲基鸟苷三磷酸（m32，2，7G5’ppp5’Np） 有些病毒也有帽子和尾结构，有些没有 PolyA尾： 防止mRNA被核酸酶降解 与mRNA其出核有关 三、核糖体RNA的结构与功能 原核及真核生物核糖体的组成 rRNA的结构特征 四、其它小分子RNA及RNA组学 RNA组学研究小的非信使RNA（small non-messenger RNA） 小的非信使RNA包括； 核内小RNA 核仁小RNA 胞质小RNA 催化性小RNA（核酶） 小片段干扰RNA等 第五节　核酸的性质 一般性质 紫外吸收 变性与复性 核酸的分子杂交 　1.粘度　高　长度与直径之比高达107 　2.密度　浮力密度 　DNA，＞1.7，RNA， 1.6，蛋白质，1.35～1.40。 　 线形双螺旋DNA、线形单链DNA、超螺旋DNA沉降系数之比为1:1.14:1.4。 　 3.酸碱性：两性偏酸 　4.溶解性： 固体，都溶于水，不溶于一般有机溶剂 　5.颜色反应（定糖法测定含量） RNA与盐酸、苔黑酚（甲基间苯二酚）反应呈绿色； DNA与二苯胺酸性时共热，生成蓝色产物。 6.核酸的水解 　酸、碱或酶水解 核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断。 DNA和RNA对酸或碱的耐受程度有很大差别。 酸易水解N-糖苷键，DNA的嘌呤碱在pH2以下即脱落而成无嘌呤酸。 碱易水解磷酸酯键，RNA在0.3N碱中即被水解，DNA对碱相对较稳定。 RNA在0.1 mol/L NaOH溶液生成环状磷酸二酯，进而生成2′-或3′-磷酸核苷 核酸酶的分类： 1.按作用底物：RNase DNase 2.按对底物的作用方式： 　　　核酸内切酶 　　　核酸外切酶 3.按对磷酸二酯键的断裂方式： 　3’－OH与磷酸之间断裂：蛇毒磷酸二酯酶 　5’ －OH与磷酸之间断裂：牛脾磷酸二酯酶 4.按水解磷酸二酯键的专一程度 　　特异性水解： 　　非特异性水解 二、紫外吸收 　　核酸中的嘌呤环与嘧啶环在260nm处有最大紫外吸收。 OD260的应用 1.DNA或RNA的定量 OD260＝1.0相当于： 50μg/ml双链DNA 　40μg/ml单链DNA(RNA) 　20μg/ml寡核苷酸 2.判断样品的纯度 DNA纯品： OD260 /OD280=1.8 RNA纯品： OD260 /OD280=2.0 (一) 核酸的变性 1.概念：指核酸双螺旋区的的氢键断裂，变成单链无规则线团结构的过程。 2.变性因素：温度升高、过酸过碱、纯水、甲醛和尿素等的存在 3.变性实质：双链间氢键断开，成为两条单链 　并不涉及磷酸二酯键的断裂，其一级结构(碱基顺序)保持不变。 　DNA变性后，它的一系列性质也随之发生变化，如粘度降低、浮力密度增加，失去部分或全部的生物活性，紫外吸收(260 nm)值升高等。 4.增色效应与减色效应： 当双链DNA解链成单链时， 260nm的紫外吸收值明显增加 　应用；检测核酸变性的情况。 例如，天然状态的DNA在完全变性后，紫外吸收(260 nm)值增加25～40%，而RNA变性后，约增加1.1%。 5.熔解温度（melting temperature Tm）： 热变性使DNA的双螺旋结构失去一半时的温度。也称为熔点。 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。 一般DNA的Tm值在82～95?C之间。 DNA的Tm值的影响因素： 1.G和C的含量 2.DNA的均一性 3.离子强度、PH 4.变性剂等 （二）复性： 　1.定义：除去变性因素后，互补的单链DNA又可以重新结合为二级双链DNA并恢复生物活性的现象，称为复性或退火 　 　　 　Tm－25℃ 2.复性的影响因素： （1）温度和时间： 一般认为比Tm 低25℃左右的温度是复性的最佳条件。复性时温度下降必须是一缓慢过程 （2）DNA浓度和片段大小： （3）DNA顺序的复杂性： 　简单顺序的DN