新孢子虫MIC6双抗夹心ELISA检测方法建立初步应用.docVIP

中文摘要新孢子虫是一种动物性细胞内寄生原虫，广泛感染牛、羊、犬等家畜动物以及其他野生动物。目前，对新孢子虫病的治疗还没有更好的治疗方法，因此预防就成了防治新孢子虫病的最好方法。本实验主要通过将纯化的两株新孢子虫MIC6（微线蛋白6）单克隆抗体分别作为检测抗体1H11和捕获抗体1A1，建立双抗夹心ELISA方法，通过检测血清中的循环抗原，为新孢子虫病的诊断提供方法和依据。关键词 新孢子虫；MIC6；双抗夹心ELISAAbstractNeospora caninum is a parasitic protozoa of animal cell, which can infect a wide range of domestic and wild animals ,such as cattle, sheep, dogs.Now, it抯 the best way to control Neosporosis by prevention rather than a treatment because of the backward medical technology. In this experiment, we use purified 1A1 monoclonal antibody as the capture antibody, and HRP-labeled 1H11 monoclonal antibodies as the detection antibody to establish a double monoclonal antibody sandwich ELISA of Neospora caninum.In this way, we provide a method and basis for the diagnosis of Neosporosis by detecting the antigen in serum.Key Words Neosporosis；microneme protein 6；double-antibody sandwich ELISA前言新孢子虫病是由新孢子虫寄生于牛、羊等动物体内细胞中所引起的一种寄生虫病。在宿主中的主要寄生部位包括有中枢神经系统、肝、脑及其他内脏组织细胞。新孢子虫可以通过口、鼻水平感染其他动物，也可以通过胎盘进行垂直感染，，主要引起母畜流产、产死胎和木乃伊胎、幼畜畸形、瘫痪、代谢失调、以及其他神经性疾病。新孢子虫的中间宿主有牛、羊、马等多种动物，终末宿主为犬和狼。新孢子虫病对畜牧业中的牛、羊等家畜动物产生了巨大的危害，在国内部分地区新孢子虫病已多有发生，在国外则对牛感染新孢子虫的研究有较深入的了解。所以，加快新孢子虫病的研究对世界畜牧业的发展有着不可估量的巨大作用。目前，对于新孢子虫病的治疗还处于探索时期，至今仍未发现能够有效治疗新孢子虫病的药物。因而在发病前期能够准确有效的对动物个体进行诊断并采取相应预防措施则成为了控制该病最有效的方法。当前，对于新孢子虫病的诊断主要局限于实验室诊断，方法主要包括有免疫组织化学法、酶联免疫吸附试验以及多聚酶联链式反应等，其中ELISA方法特异性强、敏感度高、稳定性好，方法简单而易于操作，因而在诸多的诊断过程中得以广泛的使用。对于新孢子虫病的预防，主要通过检测的手段，对引进个体进行严格的检疫，对患病个体进行隔离饲养治疗，只有确定无新孢子虫感染才可入群，以达到净化畜群的目的；另外，畜牧场要设立严格的管理条例，对死畜、流产胎牛以及胎盘等要进行掩埋或者焚烧，防止外来犬只进入场内，尽量减少畜群与犬接触的机会，彻底切断一切传播途径，为畜牧场营造一个安全、健康的环境。对于新孢子虫的检测，通常都以抗原作为最保守的检测物质，但是抗原检测代价高，对于以盈利为目的养殖场来说未必可行。检测动物个体中的抗体也是一种方法，但是通常情况下感染过新孢子虫的个体中会一直或终身存在抗体，这对于检测既往感染和近期感染的个体来说，并不能明显的区分，这就对个体近期是否感染新孢子虫的判断造成了干扰，诊断结果不具有可信度。循环抗原在许多的寄生虫研究中都可发现，它通常是指由寄生虫活虫排泄到宿主体液中的排泄物或者分泌物，这些都具有抗原的特性。我们可以根据寄生虫排泄物或者分泌物的量来间接的估量宿主内的寄生虫数量、生活阶段以及宿主的病理状况等，因此我们可以通过检测宿主内的循环抗原来检测宿主感染寄生虫的情况，从而为寄生虫的检测诊断提供一种新的可靠的方法和技术。目前用于新孢子虫检测的抗原主要有表面抗原、致密颗粒抗原以及微线抗原等。表面抗原主要用于寄生虫黏附、入侵宿主细胞，其抗原决定簇的结构都不同，但是却都有