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面包酵母的诱变选育、培养基优化及发酵过程 姓 名：孙晓晴 学 号：2008011107 年 级：2008级 专 业：生物技术 指导教师：边艳青 2010-12-25 面包酵母的诱变选育、培养基优化及发酵过程 孙晓晴 2008011107 （河北师范大学生命科学学院生物技术专业 石家庄 050000） 【摘 要】 发酵工程是生物技术的五大技术之一,是生物技术的重要组成部分,是生物技术产业化的重要环节,它是微生物学、生物化学和化学工程学有机的结合的后续课程,发酵工程实验是配合发酵工程教学开设的一门课程。根据课程特点,本学期发酵工程实验内容为模拟整个发酵过程,从菌种选育开始,经过培养基的优化,发酵过程控制,最终确定面包酵母突变株的最适生长培养基、生长规律、pH变化规律以及溶氧规律等。 【关键词】 面包酵母;诱变育种;培养基优化;发酵 酵母生产是发酵工业的一个重要组成部分,目前世界酵母年产量约200万吨,主要应用于食品工业,面包酵母是其中最典型的一种。酵母菌通常形成球形或椭圆形,对制作面包而言椭圆形的品种为最佳,俗称真酵母菌。面包酵母是在制备焙烤产品时常用的一种添加剂,它利用面粉中可发酵性糖产生的CO2膨胀面团的体积,通过面团体积的膨胀来改良面团的组织结构并改善面包的风味。因此,选育优良的面包酵母菌种有着巨大的社会经济效益。 我国在面包生产中存在的问题之一是生产周期长（一般为8-12小时）,生产效率低,与国外先进的生产方法相比,有较大差距。本实验在改良面包酵母菌种的基础上,对培养基进行优化,对发酵过程进行全面合理控制,从而进一步完善面包酵母的发酵工艺。 材料 1.1 菌种 面包酵母（来自边老师提供） 培养基 PAD培养基 马铃薯（去皮）200g,切成小块, 加 1000mL水,煮沸1h,用双层纱布滤,取出滤液,加葡萄糖20g使其完全溶解,加水定容到1L,pH自然。若为固体培养基,则加琼脂20g/L。 发酵培养基 经过2.2优化步骤选出的最优培养基配方,在文章中会介绍到。 试剂 琼脂;葡萄糖;酵母膏;蛋白胨;(NH4)2SO4;自来水 器材及用具 分析天平、普通光学显微镜、高压灭菌锅、震荡培养箱、恒温培养箱、培养皿、超净工作台、发酵罐、蒸汽发生器、空气压缩机等;锥形瓶、枪头（蓝、黄）、移液器、涂布棒、试管、血细胞计数板、计数器、酒精灯等。 发酵罐 发酵罐的结构包括罐体、挡板、搅拌、空气分布系统、热交换系统、蒸汽系统等。不同的系统作用不同,且为稳定发酵条件起到重要的作用。 试验方法 本实验以小组为单位自行设计实验流程。 2.1 诱变选育菌种 采用物理因子紫外线诱变面包酵母,DNA能够强烈吸收紫外线,尤其是碱基中的胸腺嘧啶,从而形成二聚体,改变DNA结构,引起基因突变。再筛选有利突变菌株进行培养。常用的是15瓦的低功率紫外灯,其波长集中在253.7nm,距离常用34cm,时间几十秒到几分钟不等。 2.1.1培养基配制及无菌物品准备 配制PAD固体培养基、液体培养基,准备培养皿、试管、9ml无菌水试管、涂布棒、枪头等包好,置于高压灭菌锅中,121℃,20min 灭菌。打开超净工作台紫外灭菌30min。 2.1.2 制备菌悬液 在超净内,取1ml菌悬液加入盛有9ml无菌水的试管中,计数。顺序依次进行10-1～10-8稀释。 2.1.3 涂布法接种 选取上述稀释好的浓度为×10-6和×10-7的菌悬液,各吸取0.5ml涂布在固体平板培养基上,每个稀释度涂15板,保证每个固体平板培养后菌落数在30～80个,以便菌落计数和菌落形态观察。做好标记。 2.1.4 紫外诱变 本实验设计了0s、30s、60s、90s、12s五个诱变剂量,将上述培养基分组置于超净工作台内,每个稀释度作3个平行。由于紫外线的穿透能力很差,因此要打开平皿盖,按照五个诱变剂量进行紫外照射诱变。标记。在培养箱中28℃倒置培养1～2天。 诱变时间 稀释度 0s 30s 60s 90s 120s ×10-6 1 2 3 ×10-7 1 2 3 2.1.5 突变菌株的筛选 将培养好的培养皿进行菌落计数和形态观察,找出菌落生长状态最好的平板,记下稀释度和诱变剂量。在无菌条件下挑单菌落,接液体培养基,28℃震荡培养3天,挑选生长好的菌液,4℃冰箱保存,备用。 2.2 正交试验设计优化培养基 正交试验设计（Orthogonal experimental design）是研究多因素多水平的设