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甲醇-超声法提取洋铁酸模有效成分探究 　 作者：张逢春，刘成柏，吴宗泽，齐晓娟，陈霞 【摘要】 　　目的探索高效、简捷的蒽醌成分提取方法。方法甲醇-超声法提取洋铁酸模中的蒽醌类物质，超声加热后再重新冷却处理；HPLC-MS检测提取物，并与乙醇提取法进行比较。结果甲醇-超声抽提法更有利于提取洋铁酸模中的蒽醌类物质，其提取效率是乙醇抽提法的6倍。结论甲醇-超声抽提法可以高效提取洋铁酸模蒽醌成分。 【关键词】 蒽醌； 洋铁酸模； 高效液相色谱-质谱法； 甲醇-超声抽提法 　　洋铁酸模Rumex patientia L，蓼科酸模属植物，其主要活性成分为蒽醌类物质，包括大黄素，大黄酚，大黄素甲醚及其苷类衍生物［1，2］。 　　洋铁酸模中蒽醌类物质的提取通常采用乙醇作为抽提溶剂，但是不能获得较纯的蒽醌类物质［2，3］，乙醇提取物形成浸膏不易萃取、分馏等操作，给蒽醌类成分的纯化带来困难。文献报道采用甲醇为抽提溶剂提取尼泊尔酸模（Rumex.C）中蒽醌类物质，杂质较少，且苷类成分提取率较高［4］。本文采用甲醇抽提洋铁酸模中蒽醌类物质，并用HPLC－MS检测蒽醌类含量［5］。 由于蒽醌苷类物质衍生物比较多，HPLC－MS法没有用来可以跟踪检测的离子对，故本研究用酸将提取物完全水解成游离蒽醌［6，7］，通过测定水解前后游离蒽醌的含量差值计算出蒽醌苷类的含量，并与乙醇抽提法比较［8］，旨在寻找一种高效、简捷的蒽醌成分提取方法。 　　1 仪器与材料 　　洋铁酸模，当年9月份采自长春。大黄素、大黄素甲醚、大黄酚标准品,由长春药检所提供。其他试剂均为国产化学纯。 　　250DE超声仪（上海昆山超声仪器公司）,RE52旋转蒸发仪（上海沪西分析仪器厂），C18柱46 mm×150 mm（美国 AB公司）,api4000高效液相四级杆串联质谱仪 （美国AB 公司）。 　　2 方法 　　2.1 甲醇－超声抽提法取400 g洋铁酸模干粉以 4∶1的质量比加入甲醇溶剂，60℃超声30 min，重复3次。将甲醇抽提液60℃减压蒸干。少量甲醇溶解提取物，抽提液再次减压蒸干。80℃恒重2 h，收集干粉为12 g。 　　2.2 乙醇抽提法用80％的乙醇提取20kg洋铁酸模根干粉，质量体积比为5∶1过夜，重复3次。将乙醇抽提液60℃减压蒸干。80℃恒重2 h，收集浸膏状物质为120 g。 　 　　2.3 蒽醌苷水解产物制备 　　甲醇-超声提取物与乙醇提取物各3.00 g，加入50 ml的2 mol/L的HCl，加热冷凝回流2 h。收集水解产物，60℃干燥。 　　2.4 3种蒽醌类物质的标准曲线的制作大黄素8.6 mg、大黄酚7.7 mg、大黄素甲醚9.2 mg，选用1∶1的甲醇氯仿定溶到10 ml，再逐级稀释到3，1，500，200，100 μg·ml-1。其中大黄素浓度选用0.3，0.2，50，20，10 μg·ml-1。峰面积对浓度作图，得标准曲线。 　　2.5 色谱和质谱条件的选择 　　2.5.1 色谱条件甲醇∶乙酸铵∶甲酸＝90∶10∶0.1，流速0.8 ml·min-1。 　　2.5.2 质谱条件大黄酚：（Q1/ Q2）252.8/224.9，分解能DP －60 V，碰撞能CE －27V；大黄素：（Q1/ Q2）269.0/225.1，分解能DP －25V，碰撞能CE －28V；大黄素甲醚：（Q1/ Q2）283.0/240.0 ，分解能DP －50V，碰撞能CE －30V。不同浓度的溶液进色谱进行液质联用分析，上柱时间10 min。 　　从图1中可见3种组份同时进样，有较好的跨度，分离条件合理。同浓度下大黄素甲醚的响应值偏小，大黄素的检测限是其他两种的10倍左右。 　　　3 结果与讨论 　　3.1 蒽醌标准品的工作曲线制作及浓度检测将峰面积Y对浓度X作图，经过spss11.0处理，得3条工作曲线的方程。 　　大黄素：Y（峰面积），X（浓度）(m/z 283.0 / 240.1): Y= 2 159.98 X+20 668.25 (r = 0.999 6 )；大黄酚：Y（峰面积），X（浓度）(m/z 252.8 / 224.9): Y= 43X+ -2.03e+003 (r=0.996 5)；大黄素甲醚：Y（峰面积），X（浓度）(m/z 283.0 / 240.1): Y= 20.5X+ -921(r=0.998 1)。其中大黄素浓度在0.3～10 ng/ml之间时具有较好的线性关系；大黄酚和大黄素甲醚在3～100 ng/ml时有良好的线性关系。3条标准曲线Rgt;0.99值均接近1，可以用来作为工作曲线。表1 为两种方法提取3种游离蒽醌的抽提率比较。两种抽提方