结肠癌组织中抗凋亡基因bag1及bcl2表达及意义.docVIP

结肠癌组织中抗凋亡基因bag1及bcl2表达及意义 　【摘要】 目的 研究 抗凋亡基因bag1和bcl2在结肠癌组织中的表达及意义，并探讨二者之间的关系。 方法 应用 免疫组织化学SABC法对64例结肠癌组织及10例正常结肠组织中bag1和bcl2基因的表达进行检测。结果 结肠癌组织中bag1和bcl2蛋白阳性表达率分别为64.1%和70.3%，显著高于结肠正常组织10.0%（Plt;0.05）；bag1和bcl2在结肠癌中的表达与结肠癌病理类型无关，但bag1与病理分级密切相关（Plt;0.05），而bcl2与病理分级无明显相关性（Pgt;0.05）；抗凋亡基因bag1和bcl2在结肠癌的发生 发展 过程中呈正相关，r＝0.475。结论 结肠癌组织中有不同水平的bag1和bcl2蛋白的高表达，两者相互作用并通过调节细胞凋亡而参与结肠癌的发生、发展，它们可以作为结肠癌早期筛选的一项指标，并对疾病的预后有着重要意义。 【关键词】 结肠癌 bag1 bcl2 细胞凋亡 论文代写 　　0 引言 　　结肠癌是人类胃肠道最常见的恶性肿瘤之一，且其发病率有逐年上升的趋势。细胞凋亡障碍是肿瘤发生的重要机制之一， 目前 的研究表明，凋亡是一个多受基因控制的过程［1］。bag1是最近才发现的一种多功能结合蛋白，它具有与抗凋亡基因bcl2相互结合，相互 影响 ，从而促进细胞抗凋亡的能力［14］，抗凋亡基因bag1在肿瘤发生发展中的作用正成为国内外研究的热点 问题 之一，但目前国内关于它在胃肠道肿瘤发病中作用的研究尚未见有关报道。在本研究中我们采用免疫组织化学研究了64例结肠癌中bag1和bcl2的表达情况，并就其临床意义及相互关系作了初步探讨。 论文代写 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 收集2001～2003年手术切除的结肠癌石蜡包埋组织块64例，均来自协和 医院 病理科存档标本，标本均经过4%多聚甲醛灌注固定，常规石蜡包埋连续切片，厚约5μm。病人年龄范围为35～67岁。按WHO病理分级，腺癌46例，粘液癌10例，未分化癌8例。其中高分化腺癌18例，中分化18例，低分化10例。同时选择10例正常结肠组织石蜡标本作对照。 　　1.2 方法 兔抗人多克隆bag1抗体为美国Santa Cruz公司产品。兔抗人bcl2抗体和SABC免疫试剂盒购自北京中山生物制品公司。采用SABC法测定bag1和bcl2的表达，抗bag1的工作浓度1∶50，生物素化单抗和SABC试剂的工作浓度均为1∶100。石蜡组织连续切片5μm，载玻片防脱片处理，常规脱蜡至水。石蜡切片经热抗原修复，滴加正常山羊血清封闭过夜，室温20min，甩去多余液体，滴加1∶50抗bag1或bcl2抗体，4℃敷育过夜，次日滴加生物素化山羊抗兔IgG，20℃～37℃20min，再滴加SABC试剂，20℃～37℃20min，PBS 5min×4次，DAB室温显色20 min，苏木素复染，脱水，透明，封片。以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性反应片作阳性对照。 论文代写 　　1.3 判定标准 bag1和bcl2皆以胞质、胞核棕黄色为阳性。在10×40倍光镜下随机观察5个视野， 计算 其平均数，每个视野计数100个细胞。bag1阳性细胞占肿瘤细胞数lt;10%为低表达（+），10%～30%为中度表达（++），gt;30%为高表达（+++）。bcl2阳性细胞占肿瘤细胞数lt;30为低表达（+），30%～50%为中度表达（++），gt;50%为高表达（+++）。 　　1.4 统计学方法 阳性表达率比较用χ2检验，bag1与bcl2的关系采用相关系数（r） 分析 。 论文代写 　　2 结果 论文代写 　　2.1 bag1和bcl2在结肠癌组织中的表达 　　2.1.1 bag1的表达 bag1在结肠癌组织的免疫组化染色分为不表达、胞质表达、胞核表达和在二者同时表达四种形式。大部分表达在胞核，小部分表达在胞质，呈棕黄色颗粒，染色强弱不等。bag1在10例正常组织中只有1例阳性表达，阳性率为10%，在结肠癌组织中的阳性表达有41例，阳性率为61.4%，二者有显著性差异（Plt;0.05），见图1、图2、图5。 　　2.1.2 bcl2的表达 bcl2蛋白的表达部位主要在细胞核或胞质，成灶状或弥漫状分布。在10例结肠正常组织中，bcl2蛋白阳性表达1例，阳性率为10%，主要在胞核成灶性分布。在64例结肠癌组织标本中，bcl2蛋白表达阳性45例，阳性率为70.3%，在胞核或胞浆内呈灶状或弥漫分布的棕黄色颗粒。在结肠癌组织中bcl2蛋白表达明显高于正常组