论-基因工程的基本操作程序.pptVIP

四、目的基因的检测和鉴定 多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 （从个体水平鉴定） * 1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 练习 * 2）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 练习 * 3）有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 练习 * 思考与探究 1.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？ 为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要 有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述 元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动 子才能比较有利于基因的表达； （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导 入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； （4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件， 如增强子等； （5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位， 往往要加上可以标识存在部位的基因，如绿色荧光蛋白基因等 * 2、利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞 器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下 ，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔 基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中 ，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖 蛋白是不可能的。 3、β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分 异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如 让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白， 想一想，应如何进行设计？ （1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。 （2）将cDNA前序列接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加 上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 * （3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环 素的培养基上培养大肠杆菌肠杆菌。如果表达载体未进入大肠 杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养 基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。 （4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后 从中提取β-珠蛋白。 * * §1.2 基因工程的基本操作程序 * 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 * 与RNA聚合酶结合位点 A G G U C A C G U C G A G G T C A C G T C G T C C A G T G C A G C RNA聚合酶 RNA聚合酶 RNA聚合酶 * ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 启动子 * 真核细胞的基因结构 一个典型的真核细胞基因结构示意图 编码区含有 能够编码蛋白质的序列(外显子) 不能编码蛋白质的插入序列(内含子) 真核生物的结构基因是断裂基因 非编码区