西洋参茎叶总皂甙对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能作用探究.doc

西洋参茎叶总皂甙对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能作用探究 　 作者：丁涛，尚智，温富春，张伟，张殿文，纪凤兰，徐惠波 【摘要】 目的：观察西洋参茎叶总皂甙对活化的小鼠腹腔巨噬细胞代谢和分泌一氧化氮(NO)、白细胞介素1(IL1)活性的影响。方法：将不同浓度的西洋参茎叶总皂甙加入体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中，以NO试剂盒检测培养上清液中NO的含量，以溴化四唑蓝(MTT)比色法检测巨噬细胞代谢能力及产生IL1的活性。结果：西洋参茎叶总皂甙可明显促进小鼠腹腔巨噬细胞代谢和产生NO，且NO的产生呈剂量依赖关系，对IL1的活性无明显影响。结论：西洋参茎叶总皂甙可增强小鼠腹腔巨噬细胞活性，可能是西洋参茎叶总皂甙调节机体免疫功能的重要途径。 【关键词】 西洋参茎叶总皂甙 小鼠 腹腔巨噬细胞 一氧化氮 白细胞介素1 　　西洋参为五加科人参属植物，味甘、微苦，性凉，具有滋补强壮、养血生津、宁神益智等作用。现代药理研究证明，西洋参茎叶总皂甙具有抗病毒、抗突变、抗心律失常、降低血脂、抗脂质过氧化等作用［1］。为进一步研究西洋参茎叶总皂甙的免疫调节作用，本试验观察西洋参茎叶总皂甙体外对小鼠腹腔巨噬细胞代谢和产生NO含量、IL1活性的影响。 　　1 实验材料 　　1.1 动物 Balb/c小鼠，6-7周龄，体重20-22g，吉林大学基础医学部实验动物中心提供。 　　1.2 药物及试剂 西洋参茎叶总皂甙由吉林省中医中药研究院提供：MTT、细菌脂多糖(LPS)、刀豆蛋白A(ConA)为Sigma公司产品；二甲基亚砜(DMSO)广东汕头西陇化工厂产品；RPMI1640培养基，美国GIBCO公司产品；小牛血清(NBS)北京鼎国生物技术发展中心提供；NO试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；其余试剂均为分析纯。 　　1.3 仪器 酶标仪，奥地利TECAN公司产品；CO2培养箱，日本SANYO公司产品；倒置显微镜，日本OLYMPUS公司产品；TU1800S型分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司产品。 　　2 实验方法 　　2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的制备 取小鼠6只腹部消毒后每只于腹腔内注射无血清RPMI1640培养液3ml，15min后颈椎脱臼处死小鼠，75%酒精浸泡5min，移入超净工作台，收集腹腔内液，1000r/min离心5min，弃上清，PBS平衡盐溶液洗涤细胞3次，用10%NBSRPMI1640培养液调细胞浓度至106/ml，24孔培养板每孔加细胞悬液1ml(96孔板每孔加细胞悬液100μl)，置37℃5%CO2培养箱中培养4h，弃上清，用PBS平衡盐溶液洗去未贴壁细胞，培养孔内为巨噬细胞单层［2］。 　　2.2 巨噬细胞代谢试验 96孔培养板巨噬细胞单层加入不同浓度试药10μl/孔，阴性对照加入PBS平衡盐溶液，每个浓度5个复孔，然后每孔加入10%NBSPRMI1640培养液100μl，置37℃5%CO2培养箱中培养24h后，每孔加MTT试剂10μl，继续培养4h，每孔加入DMSO100μl，微量振荡器振荡10min，酶标仪570nm处测吸光度A值［3］。 　　2.3 巨噬细胞产生NO的测定 采用硝酸还原酶法。24孔板巨噬细胞单层，每孔加入终浓度为10μg/ml的LPS0.5ml，以激活巨噬细胞，同时每孔加入不同浓度的试药1ml，每个浓度6个复孔，置37℃5%CO2培养箱中培养24h，每孔取培养上清液0.5ml待测，然后按NO试剂盒操作说明加入相应试剂，室温放置10min，分光光度计550nm波长处测定吸光度A值，根据试剂盒公式计算NO的生成量［4］。 　　2.4 巨噬细胞产生IL1的影响 采用胸腺细胞增值法。24孔板巨噬细胞单层，每孔加入终浓度为10μg/ml的LPS0.5ml，以激活巨噬细胞，同时每孔加入不同浓度的试药1ml，培养48h后收获上清，得诱生的IL1粗品，-20℃保存待测。常规法制备107/ml小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔板，每孔0.1ml，同时加入不同稀释度的IL1待测上清0.1ml，终浓度2μg/ml的ConA0.1ml，每个浓度3个复孔，置37℃5%CO2培养箱中培养68h后，每孔加MTT试剂10μl，继续培养4h，每孔加入DMSO100μl，微量振荡器振荡10min，酶标仪570nm处测吸光度A值［5］。 　　　2.5 统计分析 采用SPSS10.0统计软件进行F检验和q检验。统计结果用(±s)表示。 　　3 结果 　　3.1 对小鼠腹腔巨噬细胞代谢的影响 见表1。 　　表1 对小鼠腹腔巨噬细胞代谢的影响（略） 　　注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 　　3.2 对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响 见表2。 　　表2 对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响（略） 　　注：与阴性对