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锰对PC12细胞生长增殖及对ERK信号转导通路影响 　 作者：李妍，陈景元，蔡同建，郑刚，杜可军，骆文静 【关键词】 MnCl2；大鼠；嗜铬细胞瘤PC12细胞；p 【Abstract】 AIM: To study the toxicity of different doses of MnCl2 on rat pheochromocytoma PC12 cells in vitro and their effects on signal transduction of extracellular signalregulated kinase 1/2 (ERK1/2). METHODS: PC12 cell cultures were exposed to MnCl2 within the range of 100900 μmol/L. The inhibition of the cells during 7 d was determined by MTT assay and plate clone formation test, and ERK1/2 and pERK1/2 were determined by Western blot. RESULTS: MnCl2 at different concentrations (100, 300, 500, 700 and 900 μmol/L) could inhibit the growth and proliferation of PC12 cells in a dose and timedependent manner and the cell growth curves were changed accordingly (Plt;0.05). Western blot showed that MnCl2 decreased pERK1/2 expression in a dosedependent manner(Plt;0.05). CONCLUSION: MnCl2 can significantly inhibit the growth and proliferation of PC12 cells, possibly by downregulating pERK1/2 expression. 【Keywords】 MnCl2; rats; pheochromocytoma PC12 cell; pERK1/2 【摘要】 目的： 研究不同浓度的锰对PC12细胞生长增殖及细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)信号转导通路的影响. 方法： 体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞，以100~900 μmol/L MnCl2染毒后进行四唑盐比色实验(MTT)筛选锰的细胞毒性剂量，平板克隆形成实验观察MnCl2对细胞的抑制作用. Western blot检测ERK1/2及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (pERK1/2)表达情况. 结果： MTT、平板克隆形成实验结果显示100～900 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有不同程度的抑制作用(Plt;0.05). Western blot结果显示随着染锰浓度的增高，PC12细胞pERK1/2表达量与对照组相比有显著性差异(Plt;0.05). 结论： 一定浓度的MnCl2对PC12细胞的生长增殖有明显的抑制作用，这一作用可能是通过下调胞内pERK1/2表达实现的. 【关键词】 MnCl2；大鼠；嗜铬细胞瘤PC12细胞；pERK1/2 0引言 慢性锰中毒主要作用于黑质神经元，引起类帕金森病样症状［1］. 这主要是由于黑质含色素的神经元具有蓄积金属元素的特性. 近来有研究发现适量的锰可以抑制神经细胞增殖，引起神经细胞凋亡［2］. 丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinases, MAPKs)信号转导通路在胞浆信号转导中起重要作用［3］，其中，细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)在所有MAPKs家族成员中最早被认识，且最具特征性. 被认为是一种增殖、转化和分化MAPKs［4］. 本研究以多巴胺能PC12细胞为研究对象，观察染锰不同浓度及不同时间对细胞增殖的毒性作用和对胞内ERK1/2磷酸化水平的影响，探讨锰对神经系统损伤的可能机制，为阐明锰神经毒作用的分子机制,寻求科学的诊断和治疗方法提供新的线索. 1材料和方法 1.1材料高分化PC12细胞购自中国科学院上海生命科学研究院；胎牛血清，杭州四季青公司产品；DMEM培养基，美国Gibco公司产品；细胞培养箱，英国Forma Scientific公司