体外诱导人脐带血间充质干细胞为软骨细胞初步探究.doc

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体外诱导人脐带血间充质干细胞为软骨细胞初步探究

体外诱导人脐带血间充质干细胞为软骨细胞初步探究   作者:农丕地 解继胜 黄海玲 【摘要】 目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)体外诱导人脐带血间充质干细胞(MSCs)向软骨细胞分化的可能性。方法 由人脐静脉获得MSCs,纯化培养后用含100ng/ml IGF-1的培养基诱导,扫描电镜鉴定诱导后细胞。结果 来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现形态学上可见间充质样的细胞,间充质样细胞为类似成纤维样的细胞形态。IGF-1诱导16天后,MSCs开始呈现软骨细胞特点。结论 人脐带血MSCs可在体外经IGF-1诱导为软骨细胞。 【关键词】 胎血 间质干细胞 软骨细胞 细胞分化 胰岛素样生长因子Ⅰ Abstract: Objective To explore the feasibility of mesenchymal stem cells (MSCs) from human umbilical cord blood (HUCB) differentiating into chondrocytes in vitro. Methods MSCs isolated from HUCB with Percoll density gradient solution were culture-expanded because the cells attached and grew on dishes, then MSCs were induced with 100 ng/ml insulin-like growth factor Ⅰ (IGF Ⅰ). The differentiated cells were identified by using scanning electron microscope (SEM). Results The HUCB-derived mononuclear cells, when set in culture, gave rise to adherent cells, which exhibited either a fibroblast-like or mesenchymal-like phenotype. 16 days after IGF Ⅰ medium treatment, MSCs in monolayer cultures exhibited a chondrocytic phenotype. Conclusion MSCs can be cultured and differentiated into chondrocytes induced by IGF Ⅰ in vitro. Key words: fetal blood; mesenchymal stem cells; chondrocytes; cell differentiation; insulin-like growth factor I 间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)作为一种多潜能干细胞,因其成功避开了胚胎干细胞来源缺乏、异体排斥、道德伦理等诸多问题在实验研究和临床应用中的限制,近年来已成为干细胞领域的研究热点。其不仅支持造血系统,还可向中胚层和外胚层来源的组织分化,在一定的实验条件控制下可分化为肌细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞等[1~3]。目前,MSCs主要来源于骨髓,但由于骨髓源性MSCs存在高度病毒污染的可能,且随着年龄增长其细胞数量和扩增、分化能力出现明显下降趋势,故寻找一种能替代骨髓MSCs,并可弥补其缺陷的MSCs来源,已越来越受到各国学者的关注。人脐带血是胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液,含有丰富的干细胞,主要包含造血干细胞和MSCs。脐带血中的MSCs可在体外培养,诱导分化后能成为神经细胞、心肌细胞等[4,5]。随着组织工程学研究的深入,对于相关功能细胞研究逐渐扩展到干细胞领域,MSCs对软骨组织修复有重要意义,本实验主要探索人脐带血MSCs的分离培养以及分析其向软骨细胞分化的可行性。   1 材料和方法   1.1 材料   主要试剂和仪器:Dulbecco改良培养基(DMEM)、胎牛血清(FCS)均为HYCLONE公司产品;胰岛素样生长因子-1(IGF-1)(美国SIGMA公司);Percoll分离液(PHARMACIA公司);其它试剂均为国产分析纯试剂。CO2培养箱(SHELDONA公司);AE31型倒置显微镜(MOTIC公司);Apollo 300型扫描电子显微镜(英国APOLLO公司)。   1.2 方法   1.2.1 脐带血MSCs的分离培养   从无妊娠并发症足月分娩的脐静脉穿刺抽取15ml脐带血,肝素

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