应用台盼蓝-茜素红联合染色实时观察晶状体上皮细胞形态及活性.docVIP

应用台盼蓝-茜素红联合染色实时观察晶状体上皮细胞形态及活性 　【摘要】 目的：探讨台盼蓝-茜素红染色应用于晶状体上皮细胞形态及活性研究的可行性。方法：取大耳白兔、正常人、白内障患者的晶状体前囊膜，行台盼蓝-茜素红染色，光镜下观察细胞的形态、染色效果并判断其活性。结果：兔、正常人、白内障患者晶状体上皮细胞通过台盼蓝-茜素红联合染色均可获得良好的染色效果。光镜下可清楚显示晶状体上皮细胞的形态并能区分正常与死亡的细胞。结论：台盼蓝-茜素红活性染色可用于观察晶状体上皮细胞的形态、密度、面积以及细胞的活力，是研究晶状体上皮细胞的一种良好而实用的方法。 【关键词】 晶状体上皮细胞 台盼蓝 茜素红 活性染色 [Abstract] Objective: To assess the feasibility of trypan-blue and alizarin red vital staining to lens epithelial cells. Methords: Anterior lens capsules of rabbits, health adults and patients with cataracts were stained by trypan-blue and alizarin red, then observed the cellula appearance and the effectiveness of the staining on light microscope. Results: There were favourable effectiveness of the staining. Trypan-blue and alizarin red vital staining was capable of displaying the cellula appearance and distinguishing the normal and abnormal cells. Conclusion: Trypan-blue and alizarin red vital staining refer to lens epithelial cells, which was a practical methord to observe the morphology, density, area and the cellula vis vitalis. [Key words] Lens epithelial cells；Trypan-blue; Alizarin red; Vital staining 台盼蓝染色法是鉴定细胞活力最常用的方法之一。Spence等（1976年）认为该染色法在眼科也是评价角膜内皮活力最常用的方法。由于该法不能显示出细胞轮廓，故难以判定细胞死活的比例。茜素红能使细胞间质的钙着色，故可清晰地显示细胞的轮廓，这对于了解角膜内皮细胞的形态和结构非常有益。运用茜素红联合台盼蓝染色可成功显示出角膜内皮细胞及其活性，使角膜内皮细胞的研究迈出了一大步。晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)是白内障研究的焦点，现有的HE细胞染色法难以满足LECs形态学研究的需要特别是细胞的实时活性观察。为此我们将茜素红台盼蓝联合染色法应用于晶状体上皮细胞，以期探索一种新的、更好的LECs形态及活性研究方法。 1 材料和方法 1.1 材料 （1）正常人透明晶状体前囊膜：3例均来源于急性外伤死亡5小时以内的正常人透明晶状体，年龄20~25岁。手术显微镜下，剪除角膜和虹膜，暴露晶状体，自制截囊针于晶状体11点处做一开口，用囊膜剪切一4mm×4mm大小的中央区前囊膜，并留前囊膜下端与残留晶体囊袋相连，翻转前囊膜内面朝外。（2）大耳白兔晶状体前囊膜：10只，兔龄3~4个月，体重2~2.5kg。兔耳缘静脉空气栓塞处死后迅速摘除眼球，晶状体前囊膜制备方法同正常人晶状体前囊膜。（3）老年性白内障晶状体前囊膜：30例，皮质性，年龄41~85岁，平均67.9岁。取白内障超声乳化手术中连续环形撕囊获得的前囊膜，约4~5mm，所有前囊膜取材后立即进行染色。 1.2 染色方法 所有囊膜在制备好后，立即置于玻片上，首先用2.5%台盼蓝染色90秒，生理盐水轻轻漂洗除去染液。1%茜素红复染60秒，生理盐水轻轻漂洗，漂洗后将下端连接处剪开，前囊膜移至预先滴有生理盐水的玻片上。移动时轻轻夹着囊膜边缘，防止对晶状体上皮造成的机械性损伤，且要保证上皮面朝上。空气中自然干燥后，置光学显微镜下观察。具有活性的上皮细胞边界呈红色，核不着色。无活性的上皮细胞表现为边界不清，细胞核呈圆形，蓝色。 　 2 结 果 3种来源的晶状体上皮，