慢性脑缺血对老龄大鼠学习记忆能力及髓鞘碱性蛋白影响.docVIP

慢性脑缺血对老龄大鼠学习记忆能力及髓鞘碱性蛋白影响 　【摘要】 目的 研究慢性脑缺血对老龄大鼠学习记忆能力和髓鞘碱性蛋白(MBP)的影响。方法 Wistar健康老龄大鼠50只，随机分为2组，假手术组和模型组；采用Morris智能水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力的改变情况；采用免疫组化法结合彩色病理图像分析仪测量平均灰度值观察各组MBP在内囊和胼胝体的表达。结果 和假手术组比较，模型组学习记忆能力明显下降，MBP灰度值明显升高，差异具有统计学意义。结论 慢性脑缺血的病理改变可能涉及髓鞘脱失，髓鞘脱失可能为慢性脑缺血引起的认知功能障碍原因之一。 【关键词】 慢性脑缺血；学习记忆；髓鞘碱性蛋白 慢性脑缺血作为神经系统的一种常见病理状态，伴发于脑动脉硬化、脑血管性痴呆、阿尔茨海默病、Binswanger病及动静脉畸形等多种疾病的病理过程中，发病早期以认知功能损害为主要表现，最终可导致持久或进展性的认知与神经功能障碍〔1〕。其病理过程不仅包括神经元的变化而且存在白质髓鞘的损伤，神经元缺失可导致认知功能障碍已被大量研究证实，对白质髓鞘的损伤是否引起认知功能障碍的研究较少〔2，3〕。髓鞘碱性蛋白(MBP)是中枢神经髓鞘膜的主要成分，具有神经组织特异性，其含量变化可反应脑白质少突胶质细胞髓鞘的损伤的程度〔4〕。本文通过结扎老龄大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型，观察其学习记忆功能和MBP的变化，为进一步探索慢性脑缺血的防治途径建立实验基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 　　健康Wistar大鼠50只，雌雄不拘，12～14月龄，体重450～550 g，由河南省郑州大学实验动物中心提供；随机分为假手术组和模型组，每组25只，2月后行行为学评价和免疫组化测定。 　　1.2 动物模型制作 　　参照〔1〕制作慢性脑灌注不足动物模型。大鼠术前12 h禁食，4 h禁水，用10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉，保证手术期间有自主呼吸，仰卧固定，前部去毛消毒后，正中切开，分离出双侧颈总动脉，双重丝线结扎，间断缝合皮肤，术后送到通风的动物房饲养。假手术组除不结扎双侧颈总动脉外，余处理同动物模型制作。 　　1.3 Morris水迷宫行为的测定 　　定位航行试验：用于测量大鼠的学习和记忆能力，历时5 d。第1天让大鼠自由游泳2 min，从第2天起，每日分上﹑下午两段，每段训练4次，训练时选择四个不同象限为入水点，将大鼠面向池壁放入水中，观察并记录大鼠寻找并爬上平台的路线图，所需时间(逃避潜伏期)，如果大鼠在120 s内未找到平台，需将其引至平台，这时潜伏期记为120 s，每次训练间隔60 s，记录第5天的逃避潜伏期时间。空间搜索试验：用于测量大鼠学会寻找平台后对平台空间位置记忆的能力，即在第6天的第5次训练时撤除平台，然后任选一个入水点将大鼠面向池壁放入水中，测其在120 s内跨过原平台所在位置的次数。 　　1.4 取材与切片 　　行Morris迷宫测试后，10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉，用4%的多聚甲醛经主动脉插管灌注固定，取脑后置于4%的多聚甲醛中后固定24 h，取视交叉到小脑的冠状切面，然后经洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋，冠状位切片，片厚3～4 μm，用于MBP免疫染色。采用SABC法，羊抗MBP多克隆抗体IgG使用效价为1∶100，DAB显色，步骤按说明书进行。MBP以细胞浆有棕黄色颗粒沉着为阳性细胞。应用Q550c型德国产Leica彩色病理图像分析仪,Qwin软件分析系统测量平均灰度值。 　　1.5 统计学处理 　　计量资料以x±s表示,使用SPSS10.0统计软件进行单因素方差分析和t检验。 　　2 结 果 　　2.1 一般情况 　　动物麻醉清醒后均出现不同程度的精神萎靡，反应迟钝，进食减少。术后1 d假手术组鼠精神恢复，反应灵敏，进食增多。模型组均表现运动减少、不能进食、反应迟钝，部分大鼠共济失调，3～5 d后大鼠精神、反应、进食逐渐恢复，1 w后接近正常。假手术组大鼠死亡2只，模型组大鼠结扎双侧颈总动脉后死亡7只，死亡率约为28.0%。 　　　2.2 大鼠学习和记忆的能力的测定结果 　　模型组大鼠学习和记忆能力减退(P＜0.05)。见表1。表1 各组大鼠学习和记忆的能力结果比较(略) 　　2.3 慢性缺血对大鼠内囊和胼胝体MBP表达的影响 　　慢性缺血可导致大鼠内囊和胼胝体MBP表达增加(P＜0.05)。见表2。表2 各组大鼠不同脑区MBP灰度值的比较(略) 　　3 讨 论 1992年，De la Torre〔1〕首次永久性结扎大鼠双侧颈总动脉制作出慢性脑缺血的动物模型。由于该动物模型操作简便，重复性好，且完全结扎双侧颈总动脉缺血程度基本相同，使实验各组间、个体间均具有很大可比性。Mo