慢性阻塞性肺病患者细胞因子及氧自由基相关性.docVIP

慢性阻塞性肺病患者细胞因子及氧自由基相关性 　 作者：王春雷 蔡日丹 康健 李振华 【摘要】 目的 探讨慢性阻塞性肺病(COPD)患者细胞因子与氧自由基相关性及对肺功能的影响。方法 选自2006年6月至2007年5月住院的COPD患者35例，急性加重期组20例(A组)，稳定期组15例(B组)，我院内科健康体检者10名作为对照(C组)。采用ELISA法检测血清中白介素6(IL6)、白介素8(IL8)、肿瘤坏死因子(TNFα)的质量浓度。细胞色素C还原法测外周血中性粒细胞释放超氧阴离子(O2)水平。并分析O2水平与细胞因子及肺功能、血气之间关系。结果 A组IL6、IL8、TNFα水平显著高于B和C组(Plt;0.01)。A组及B组患者外周血中性粒细胞释放O2量显著高于C组(Plt;0.01)。A组患者外周血中性粒细胞释放超O2水平与其第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占预计值百分比、FEV1/用力肺活量、动脉血压分压呈明显负相关(r分别为-0.539，-0.531，-0.542，-0.652，P均lt;0.01)。同时A组患者外周血中性粒细胞释放超O2水平与血浆IL6、IL8、TNFα浓度呈直线正相关(r分别为0.895，0.876，0.892，P均lt;0.01)。结论 COPD患者急性加重期炎症细胞在细胞因子等刺激下活化，释放氧化物质增多，对导致COPD急性加重期肺功能恶化可能起重要作用。 【关键词】 慢性阻塞性肺病;细胞因子;氧自由基;肺功能 慢性阻塞性肺病(COPD)发病机制复杂，其中氧化应激是COPD发病的重要机制之一。中性粒细胞是免疫系统的防御细胞，也是反应性氧代谢产物、炎症性细胞因子、脂质介质、抗菌肽以及损伤酶的来源之一〔1〕，它参与了慢性支气管炎的黏膜化生和肺气肿时肺组织的破坏。中性粒细胞释放超氧阴离子(O2)等活性氧代谢产物和蛋白酶，释放肿瘤坏死因子(TNFα)、白介素8(IL8)、白介素6(IL6)等细胞因子，与其他炎症细胞(如巨噬细胞、气道上皮细胞)释放的炎症介质共同作用，促使更多的中性粒细胞活化、聚集，放大炎症，加重损伤〔2〕。本实验通过测定COPD患者血清细胞因子和氧自由基的变化，探讨细胞因子和氧自由基在COPD发病中作用。 　　1 对象与方法 　　1.1 对象 选自2006年6月至2007年5月住院的COPD患者35例，其中男28例，女17例，年龄61～87岁，平均年龄(67.9±5.8)岁，诊断符合2002年中华医学会呼吸分会慢性阻塞性肺疾病诊治指南规定的标准〔3〕，根据其病史、临床症状、体征、X线胸片、心电图、肺功能又将其分为：急性加重期组20例(A组)，为短期内咳嗽、咳痰、气短和(或)喘息加重痰量增多，伴发热的新入院患者;稳定期组15例(B组)，为急性加重期患者经吸氧、抗炎、止咳、祛痰，临床症状明显减轻，等待出院的患者。正常对照组：我院内科健康体检者10名(C组)。所有受试均知情并签署知情同意书。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本采集 所有受试者入院时、治疗后及内科健康体检者均采肘静脉血14 ml，其中4 ml离心后迅速分离血清，样品置-20℃冰箱中保存备检。治疗前后进行常规血气分析和肺功能检查。 　　1.2.2 细胞因子的测定 采用ELISA法检测血清中IL6、IL8、TNFα浓度，所用仪器为美国DPC公司Immulite免疫化学发光分析仪，试剂购自该公司。 　　1.2.3 分离中性粒细胞 所有受试者入院时、治疗后及内科健康体检者采肘静脉血14 ml，其中10 ml加3.8%枸橼酸钠3 ml抗凝，分4个试管加入分离剂3 ml，置于冰中。用密度梯度离心法分离获得中性白细胞，1 800 r/min离心40 min，除去最上层的血浆层和最下层的红细胞层，用KRP(KrebsRingrPhosphate)缓冲液(pH7.4)冲洗细胞三次，1 500 r/min离心30 min两次，沉淀物悬浮于200 μl KRP缓冲液中，置于冰中待测。 　　1.2.4 细胞色素C还原法测中性粒细胞(O2)释放量 双波分光光度仪在波长为550～540 nm的条件下，在反应试管中加不含Ca2+的KRP缓冲液1 ml，5%细胞色素C 10 μl,上述分离的中性粒细胞20 μL，37℃下预热8 min，分别计算受试者入院时、治疗后及内科健康体检者外周血中性粒细胞释放O2量。用超氧化物歧化酶(SOD)作为对照。每人测5次，取平均值。 　　1.3 统计学处理 采用SPSS11.0统计学软件进行统计分析，实验数据用x±s表示，统计分析用t检验。COPD患者外周血中性粒细胞释放的O2水平与肺功能、血气及细胞因子之间的相关性用Spearman等级相关性分析。