抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌TGF-β1表达影响.docVIP

抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌TGF-β1表达影响 　 作者：王振涛，韩丽华，惠玲，杨凤鸣，张颖 【摘要】 目的观察抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌转化生长因子β1（Transforming Growth Factor-β1）表达的影响。方法喂饲呋喃唑酮建立Wistar大鼠扩张型心肌病模型，随机分组后药物干预8周，检测大鼠心肌TGF-β1的表达。结果各组TGF-β1阳性表达的比较：与模型组相比，中西药联用组、中药大剂量组和卡托普利组均能明显抑制TGF-β1的表达（Plt;0.05），其中以中西药联用组抑制TGF-β1的表达最明显。结论抗纤益心方能够抑制扩张型心肌病大鼠心肌TGF-β1的表达，这可能是其干预扩张性心肌病（DCM）大鼠动物模型心室重构的机制之一。 【关键词】 抗纤益心方；扩张型心肌病；转化生长因子β1；心室重构 　扩张型心肌病的心室重构是该病发展的重要病理环节。心肌细胞和细胞外基质(Extracellular matrixc,ECM)的变化是心室重构的结构基础。心肌细胞外基质时刻处于一个动态的合成－降解的过程，一旦动态平衡被打破，胶原网络发生重建，必将加重左室重构的程度［1］。有研究表明，TGF-β1在心肌胶原网络重建中起重要作用［2］。本研究通过观察抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌TGF-β1表达水平的影响探讨其作用机制。 　　1 材料与仪器 　　1.1 用药抗纤益心方干浸膏(由党参，黄芪，云苓，白术，丹参，川芎，红花，赤芍，泽兰，益母草组成)：由河南省中医院制剂室提供，每克浸膏相当于生药4 g；呋喃唑酮片：福建省三明天泰制药有限公司生产，批号卡托普利片：常州制药厂生产，批号：200502242；戊巴比妥钠：中国医药（集团）上海化学试剂公司生产，批号： 　　1.2 试剂TGF-β1多克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司。 　　1.3　仪器精密电子天平（上海民桥电子仪器厂JY-1001型）；石蜡切片机(德国莱卡公司，型号SM-2000R）；光学显微镜（日本OLYMPUS公司）；摄影显微镜（德国莱卡公司）；Image-Pro Plus 6.0（IPP）图像处理分析系统（美国Media Cybernetics公司）。 　　2 方法 　　2.1 动物造模及分组选取体质量为（61.9±7.0）g的Wistar健康雄性大鼠(由郑州大学动物中心提供，合格证号：510116)。将动物按5∶1随机分为模型组和正常对照组。参照文献方法［3］，模型组在饮水中加呋喃唑酮 (按1 kg水加700 mg呋喃唑酮配置) 喂养，喂养8周。正常组动物常规饲养，不进行药物干预。 　　2.2 治疗方法造模8周后开始药物干预，给药1次/d。正常组动物常规饲养，不进行药物干预；模型组动物每日管饲与治疗组同等容积的生理盐水；抗纤益心方治疗小剂量组动物每日管饲抗纤益心方4.7 g/（kg·d）；抗纤益心方治疗大剂量组动物每日管饲抗纤益心方18.8 g/（kg·d）；卡托普利对照组动物每日管饲卡托普利10.125 mg/（kg·d）；中西药联用组动物同时管饲卡托普利及抗纤益心方大剂量。8周后处死动物。 　　2.3 心肌取材动物麻醉后，迅速打开胸腔，取出心脏，滤纸吸干水分，剪去左、右心房及右心室，然后从心尖处沿冠状面切取心肌组织，放入10%中性缓冲福尔马林液中固定，石蜡包埋，制备厚4 μm组织切片。 　　2.4 观察指标TGF-β1阳性表达平均光密度值（OD）的测定：用免疫组化法染色组织切片。光镜下，每只大鼠观察6张切片，每张切片在图像分析系统上随机选取相等的5个高倍视野(×400)，测定OD值，每张片子测量后取平均值。平均光密度与阳性染色度成正比，即平均光密度值越大，代表阳性染色越强。 　　2.5 统计学方法数据用SPSS13.0 For Windows统计分析软件处理，计算所有数据以±s表示，组间比较采用单因素方差分析。 　　　3 结果 　　3.1 各组TGF-β1阳性表达的比较光镜下，各组TGF-β1的阳性染色呈棕黄色或棕褐色，阳性区域主要分布于心肌间质细胞内（见图1）。各组TGF-β1染色可见：正常组心肌纤维排列整齐，心肌细胞间质中有少量棕黄色阳性表达，颜色较淡。模型组心肌细胞间质中有大量棕黄色或棕褐色阳性表达，可看到阳性染色成片或反复重叠排列在心肌间质中，染色较深。卡托普利组、中药大剂量组、中西药联用组心肌细胞结构清晰，心肌细胞间质中有部分棕黄色阳性表达，三者无明显差别，但与模型组相比，表达明显减少。 　　3.2 各组OD值比较正常组、中西药联用组、中药大小剂量组和卡托普利组与模型组相比TGF-β1阳性表达明显减少（Plt;0.05）；中西药联用组、卡托普利组、中药大剂量组和小剂量组与模型组相比明显抑制T