实验六：叶绿体的分离与荧光观察.ppt

实验五：叶绿体的分离与荧光观察 【课前预习】 1．分离细胞器的一般原理和方法？ 2．叶绿体的荧光为什么不能用普通光学显微镜观察到？ 一、实验目的 １　通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途 2．通过光镜鉴定叶绿体的纯度及了解叶绿体形状 3．观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，了解荧光显微镜的原理和使用方法 4 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。 二　实验原理 采用差速离心分离细胞器； 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体； 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态和分布； 三、实验用品 1. 器材 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片。 2. 材料 新鲜菠菜叶。 3. 试剂 0.35mol/L氯化钠溶液 。 四、实验方法 （一）叶绿体的分离与观察 1。取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。 2。加入0.35mol/L氯化钠溶液， 共150ml，研磨，制成匀浆； 3。将匀浆用6层纱布过滤于烧杯中； 4。取滤液4ml在1000r/min下离心2min，取上清； 5。上清液3000r/min，离心5min．去上清，沉淀即为叶绿体； 6。加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀； 7。取叶绿体悬液1滴于载玻片上，加盖片； 8。普通光镜下观察；荧光显微镜下演示。 （二）菠菜叶徒手切片观察 新嫩菠菜叶斜切面1片，0.35mol/L氯化钠溶液1滴；加盖片轻压：光镜下观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示。 【实验结果】 差速离心获得并纯化的叶绿体镜检为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。菠菜叶片徒手切片可以观察到三种细胞分别是边缘呈锯齿形的鳞片状的表皮细胞，构成气孔的成对的肾形保卫细胞，排列成珊栏状的长形和椭圆形叶肉细胞。 【实验报告】 1．绘图：菠菜叶肉细胞的形态，示叶绿体。 2．观察经过加热和未加热这两种叶绿体在形态上的区别，并绘出草图。 3简述：叶绿体的分离原理和方法； * * Low speed High speed Differential centrifugation *