丁酸氯维地平原料药物成分的反相高效液相色谱分析.docVIP

　　丁酸氯维地平原料药物成分的反相高效液相色谱分析 　　丁酸氯维地平的化学名为 4-（2,3-二氯苯基）-1-4-二氢-2-6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸甲基-（1-氧代丁氧基）甲酯，是由英国 AstraZeneca 公司研制开发的第 3 代新型短效二氢吡啶类静脉注射用钙通道拮抗剂，于 2008 年 8 月经美国 FDA 批准上市，主要用于急性高血压的治疗及术后血压的控制[1].目前各国药典均未收录丁酸氯维地平的质量标准，其中关于丁酸氯维地平中有关物质测定方法的报道中，熊野娟等[2]采用有缓冲盐的流动相体系，使用梯度洗脱，测定了丁酸氯维地平和 7 种杂质；袁慧雅等[3]仅对丁酸氯维地平进行了研究，并未对专属性试验中产生的降解杂质进一步研究；刘艳华等[4]采用有缓冲盐的流动相体系，并使用梯度洗脱法测定丁酸氯维地平和 10 种杂质。本实验选用丁酸氯维地平及其 14 种杂质来优化色谱方法，有 5 种杂质（杂质II、IV、VII、XIII、XVI）尚未见文献报道，其中杂质 IV 是丁酸氯维地平水解脱去丁酸酯形成的杂质，对丁酸氯维地平原料药的质量具有重要影响，杂质 II、XIII、XVI 是工艺杂质，杂质 VII 是丁酸氯维地平脱氢氧化和水解形成的杂质。经过色谱条件的优化，本实验采用甲醇ndash;环己烷ndash;水（70∶0.5∶30）作为流动相，并根据样品检测及强制降解试验结果，在进行方法学验证过程中，研究了杂质I、III、IV、V.结果表明，此方法专属性高，操作简单、分离度好，重复性好，准确度、精密度高。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 　　Agilent 1260 型高效液相色谱仪，包括 G1311B二元泵、G1329 B 自动进样器、G1316C 柱温箱和G4212B DAD 检测器。 　　1.2 药品和试剂 　　丁酸氯维地平对照品（批号 130306,质量分数99.85%）、原料药（批号 130715、130816、130817、130818）以及 14 个杂质对照品均由天津药物研究院化学制药部提供。甲醇为色谱纯（天津市康科德科技发展有限公司），环己烷为分析纯（天津市凯信化学工业有限公司），水为 Milli-Q 超纯水。 　　杂质对照品分别为 4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸二丁酰氧甲基酯（杂质I）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸-3-乙氧基-5-甲酯（杂质 II）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（杂质 III）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸-3-甲酯（杂质 IV）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸-3-丁酰氧基甲基酯-5-甲酯（杂质 V）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3-羧酸甲酯（杂质 VI）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-3,5-二羧酸-3-甲酯（杂质 VII）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-3-吡啶羧酸甲酯（杂质VIII）、6-（2,3-二氯苯基）-4-甲基-2-氧代环己基-3 烯-甲酸甲酯（杂质 IX）、二氰基乙基-4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸酯（杂质XI）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸单甲酯（杂质 XII）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸-3-氰基乙氧基-5-乙酯（杂质 XIII）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸-3-丁酰氧基甲基酯-5-乙酯（杂质 XV）、4-（2,3-二氯苯基）-2,6-二甲基-1,4-二氢吡啶-3,5-二羧酸-3-氰基乙氧基酯-5-甲酯（杂质 XVI），峰面积归一化法测定质量分数分别为98.23%、96.29%、98.12%、98.46%、98.18%、95.13%、97.58%、95.39%、95.79%、95.54%、96.49%、97.51%、95.15%、96.30%. 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　 C18色谱柱（250 mm4.6 mm,5?m）；流动相为甲醇ndash;环己烷ndash;水（70∶0.5∶30）；体积流量为 1 mL/min;柱温为 30 ℃；检测波长为240 nm;进样体积为 20 mu;L. 　　2.2 专属性试验 　　2.2.1 样品+1%杂质的溶液 称取丁酸氯维地平及各杂质适量，用甲醇溶解并稀释制成混合溶液。其中丁酸氯维地平质量浓度为 0.3 mg/mL,各杂质质量浓度为 0.00