第八章糖及其代谢物的测定.DOCVIP

第八章 糖及其代谢物的测定 第一节 血清(浆)葡萄糖测定 血液中的葡萄糖称为血糖。血糖测定是临床生化检验中历史最久、占日常工作量比重较大的项目之一。过去测定血糖多采用全血，但目前多采用血清或血浆。测定血糖的方法很多，可分为三大类：氧化还原法、缩合法及酶法。国际上推荐的参考方法是已糖激酶法，但试剂比较昂贵，不适用于常规分析。我国已淘汰氧化还原法，推荐的方法是葡萄糖氧化酶法，而目前有些基层单位仍沿用邻甲苯胺法。 实验39 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调pH至7.0，用蒸馏水定容至1L。 2．酶试剂 称取过氧化物酶1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml中，用1 mol/L NaOH调pH至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。 3．酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。 4．酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。 5．12mmol/L苯甲酸溶液 溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L。 6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按表8-1操作。 表8-1 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0.02 葡萄糖标准应用液 － 0.02 － 蒸馏水 0.02 － － 酶酚混合试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】 空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L 。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 (2) 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 (3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。 (4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3．生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动。 4．病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等) (1) 胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。 (2) 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 (3) 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。 【注意事项】 1．葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。 2．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 3．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗