骨髓间充质干细胞地来源及生物学特性.doc

骨髓间充质干细胞的来源及生物学特性 1、相关定义 1.1、羊水干细胞的概念 在上个世纪初就有关于羊水细胞形态学方面的报道,1966 年科学家 Steele 和 Breg 成功分离了人羊水细胞,并对其进行了染色体核型分析(1996)。随后,关于羊水细胞的 研究逐渐增多,并广泛用于胎儿发育异常的产前诊断(Gosden 1983; Hoehn and Salk 1982; Nadler and Gerbie 1971)。2003 年,Int Anker(2003)等学者发现在人羊水中存在一类细胞 与骨髓间充质细胞非常相似,表达骨髓间充质的一些表面标记,不表达造血干细胞的表 面标记,并且具有分化为脂肪细胞和成骨细胞的能力,因此将这种细胞命名为羊水源间充 质干细胞(Amniotic Fluid-derived mesenehymal Stem Cell , AFMCs)。2003 年 Prusa 等在 羊水中发现了 Oct4 阳性的细胞,提示羊水中可能含有一些具有胚胎干细胞特性的多能 细胞(2003)。之后,很多实验也证明了人羊水中含有 Oct-4 表达阳性的细胞(Bossolasco et al. 2006; Karlmark et al. 2005; Peng et al. 2007; Tsai et al. 2004; 李现铎等 2006)。 直到 2007 年,De Coppi 等学者的研究结论引起了学术界的巨大轰动(2007)。他们 成功分离培养了孕中期的羊水细胞,并用免疫磁珠的方法筛选出 CD117 阳性细胞进行 扩增。这些羊水细胞其中 90%都表达 Oct-4,在体外倍增 250 次后仍保持较高的端粒酶 活性。增殖速度快,培养方法简单,在体外不需要饲养层也能传代培养。具有多项分化 潜能,在体外可向三个胚层细胞分化,更重要的是在体内分化不形成畸胎瘤,与胚胎干 细胞相比具有更好的安全性。De Coppi 等学者首次将这种细胞命名为羊水干细胞 (Amniotic Fluid Stem Cell,AFS),从此揭开了羊水干细胞研究的新领域。 1.2、胰腺干细胞的概念 干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的早期未分化细胞,按其来源可分为胚 胎干细胞(embryonic stem cell, ESC)和成体干细胞(adult stem cell, ASC)。胰腺干细胞 是存在于胰腺组织中、能自我更新、具有多向分化潜能的一类成体干细胞,其特点是在 自然分化过程中首先分化为胰腺组织的各种细胞。 胰腺干细胞既以对称性分裂扩增数 量,又以非对称分裂进行自我更新和产生不同分化程度的子代细胞,并逐渐发育为完整 的胰腺组织[4]。 胰岛再生现象提示胰腺中存在干细胞[5]。已陆续报道从人、小鼠、大鼠等体内分离 出胰腺干细胞[6,7,8],这些细胞在体外可以克隆扩增并能分化为胰岛细胞。2004 年 Dor 2 等利用遗传谱系标记(genetic lineage tracing)技术,证明小鼠在正常和部分胰腺切除情 况下的 β 细胞再生都是由现存的 β 细胞复制而来,而不是分化自干细胞 [9]。尽管他的研 究支持了 β 细胞复制是成年小鼠 β 细胞扩增的主要机制,但是该研究也存在一些有争议 之处。如试验中应用三苯氧胺(tamoxifen)给予小鼠腹腔或皮下每周注射两次、注射两 周半时间,这或许抑制了已损伤胰岛附近的导管内祖细胞的新生,而且去除三苯氧胺后 的试验时间短,不足以这些祖细胞进行分化[10]。另外,试验中采用的部分胰腺切除模型 也许不足以诱导胰腺干细胞群分化进而再生胰腺,Zhang 认为应用 90%胰腺切除术或 IFN-γ 转基因模型也许会较有效地引起胰腺再生[11]。Zaret 则认为是否由于试验中使用的 重组酶基因发生”遗漏”,也即这些重组酶基因可能产生一些非 β 细胞的标记基因,不能 被检测到[12]。因此 Dor 等的研究结果并不能否定胰腺干细胞的存在。 1.3、miRNA的定义与产生 1993年,Lee 11(:等[11在秀丽新小杆线虫(c. elegans)中意外地发现了 一种定时调控胚胎后期发育的miRNA—nn4,它是一种非编码RNA,长 度为22nt,它通过与靶基因lin-14 mRNA3’UTR区互补配对,从而抑制 Lin-14蛋白质的表达。Reinhart et al ( 2000)禾liPasquinelli et al( 2000) 又在线虫中发现了第二个有异时性幵关功能的let-7 RNA,其靶基因控 制着线虫从L4阶段到成虫阶段的发育转变。lin-4和let — 7的转录产物均 为一种约含有22个核苷酸的RNA.表达具有时fnj禾I组织特异性。既往称 此类小分子RNA为小时序RNA。此后,3个著名的研究小