Ezrin+siRNA对骨肉瘤细胞株SaOS-2+ezrin表达及生物学行为的影响.pdfVIP

鹅一军暖大学姆|擘位论立 中文摘婺 Ezrin ezrin基因表达及生物学行为的影响 siRNA对骨肉瘤细胞株SaOS．2 巾文摘要 背景 骨肉瘤是最为常见的原发性恶性骨肿瘤，约F吁骨肿瘤的20％，多发于青少年。 随若外科技术和影像学技术的发展，联合放疗、化疗和免疫治疗的进步，骨肉瘤 的治疗取得很大的进展。但目前的治疗手段还无法从根本上解决骨肉瘤的转移问 题．仍有40--50％的患者死于骨肉瘤复发和转移。肿瘤的侵袭和扩散是一个复杂 的过程，需要个别的细胞从肿瘤的中心侵袭进入周围组织和细胞外基质。细胞的 迁移需要极性化、伸展、黏附、去黏附和退缩等复杂事件的协调配合。许多蛋白 白家族成员之一。连接细胞膜和actin细胞骨架，参与细胞骨架组建。出于ezrin 是酪氨酸激酶的底物，并和粘附分子如CD43、CD44和细胞问粘附分子一1、2结 合，所以也被认为参与与细胞迁移和转移相关的细胞内信号转导。更重要的是， 高水平的CD44依赖于ezrin表达，二者均与肿瘤细胞的侵袭和转移行为有关。 的发现进一步证实了ezrin和肿瘤生成的关系。最近研究表明，ezrin表达对小鼠 骨肉瘤和横纹肌肉瘤的转移行为是必需的。通过反义转染或稳定表达短发央 鼠模型的转移能力，并能导致Akt和MAPK活性的下降。 RNA干扰(RNAi)是一种序列特异性、转录后基因沉默机制，由双链RNA 而普遍存在的抗病毒方式，用来保持基因组完整性，防止细胞受到病毒感染和调 节细胞基因表达。RNAi依赖于反义链与靶基因转录本互补的双链RNA (dsRNA)形成。研究证明，在哺乳动物细胞内也可诱导出RNAi序列特异性抑 制。向哺乳动物细胞内转染双链siRNA可导致快速的和有效的靶基因mRNA降 解，并避免了由长的双链RNA触发的非特异效应。目前，RNAi已广泛应用于基 因组功能、抗病毒和抗肿瘤治疗的研究。 我们应用2Int的小干扰RNA(small RNA，siRNA)引发人骨肉瘤 interfering 细胞ezrin基因沉默，借此研究对人骨肉瘤细胞生物学行为的影响，为骨肉瘤转 移基3--RNA的药物治疗提供理论基础。 褊■军医凡学媾．{。学他论文 中文摘整 目的： 1、设计、合成及筛选高效抗骨肉瘤转移相关基因一肼加的小分子干扰 RNA(siRNA)，于人骨肉瘤细胞SaOS．2内引发内源性ezrin基因沉默。 2、探讨siRNA实现特异性基因沉默作用时的浓度时间效应关系。 3、探讨ezrin基因沉默对人骨肉瘤细胞SaOS．2体外细胞生物学行为的影响，为 进·步应用载体长效表达siRNA实验及体内抑制骨肉瘤转移提供理论依据。 方法： l、设计、化学合成2条ezrin(GeneBank siRNA用阳离子脂质体 2、体外培养入骨肉瘤细胞SaOS-2，以150nM 2000转染细胞，应用实时定量PCR检测转染后48小时的细胞 Lipofectamine 内ezfinmRNA表达，筛选出抑制效率最高的siRNA及其浓度进行下一步实 验； siRNA mRNA表达；再以这条 转染人骨肉瘤细胞，应用实时定量PCR检测ezrin mRNA及蛋白质 及蛋白质，采用实时荧光定量PCR和Westernblot检测ezrin 表达情况。 PCF侵 4、应用MTT法检测siRNA干扰后骨肉瘤细胞的增殖能力，以Millieell