稳定转染NOR1抑制5鄄8F细胞片状伪足形成和Wnt信号通路.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2012, 39(9): 887~892 定转染NOR1 抑制5 8F 细胞片状 伪足形成和Wnt 信号通路* 1, 2) 1) 1) 1) 1) 1) 1)** 向波 王 卫 李文娟 唐 珂 曾朝阳 李小玲 李桂源 1) 2) ( 中南大学肿瘤研究所，长沙4 10008； 非可控炎症与肿瘤湖南省重点实验室，长沙4 10013) 摘要 细胞骨架是真核细胞 的蛋白纤维网络结构，不仅与保持细胞形态结构有关，而且影响细胞黏附和细胞运动 NOR1 是从鼻咽癌中克隆得到的新基因，在鼻咽癌组织和细胞系 表达下调 本研究建立了NOR1 稳定表达的鼻咽癌5-8F 细胞 系 过表达NOR1 引起高转移性鼻咽癌5-8F 细胞形态改变，抑制片 伪足形成、细胞表面积缩小、细胞聚集性增强 扫描 电镜检测发现，NOR1 抑制了5-8F 细胞膜微绒毛的数量，引起细胞膜表面改变 细胞骨架染色发现，NOR1 过表达导致 5-8F 细胞actin 骨架连续性破坏，应力纤维增加 Realtime RT-PCR 检测发现，NOR1 引起5-8F 细胞Wnt/ -catenin 信号通路 分子Wnt5A 受体FZD5 、FZD7 表达下调，抑制了 -catenin 蛋白入核 提示NOR1 抑制Wnt/ -catenin 信号通路激活，破坏 细胞骨架连续性，抑制细胞膜微绒毛与伪足形成 关键词 NOR1 ，鼻咽癌，片状伪足，Wnt 信号通路 学科分类号 Q24 ，R730 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2012.00012 NOR1 是从鼻咽癌中克隆得到的新基因，在鼻 37℃培养；人胎脑cDNA 文库、pIRES neo3 质粒 [1-3] 咽癌中表达下调 NOR1 基因编码区两个偶联的 购自Clontech 公司；Pyrobest DNA 聚合酶、dNTP、 编码区单核苷酸多态性位点 (coding region single SYBR Premix DimerEraser、RNA free DNase 玉、限 nucleotide polymorphism，cSNPs) 与鼻咽癌发病相 制性内切酶 R 、 H 等购自大连宝生物公 Eco 吁 Bam 玉 关[4] 在鼻咽癌HNE1 细胞 恢复NOR1 表达，可 司(TaKaRa)；T4 DNA 连接酶、逆转录试剂盒 以抑制肿瘤细胞的生长与增殖能力[1, 5] 本研究建 (reverse transcription system)购自Promega 公司；脂 立了稳定表达NOR1 的鼻咽癌高转移性5-8F 细胞 质体Lipofectamin2000、TRIzol 购自Invitrogen 公 系，观察发现NOR1 引起5-8F 细胞形态改变，抑 司；Anti- -catenin 多克隆抗体购自Cell Signaling 制片 伪足形成 扫描电镜发现稳定转染NOR1 公司；核- 胞浆蛋白制备试剂盒(nuclear-cytosol 引起5-8F 细胞膜微绒毛减少 NOR1 抑制了5-8F extraction Kit)购自Pierce 公司；Anti-NOR1 多克隆 细