高效液相色谱法工作原理.pdf

第十六章第十六章 高效液相色谱法高效液相色谱法 第十六章第十六章 高效液相色谱法高效液相色谱法 一、一、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 一一、、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 二、二、流程及主要部件流程及主要部件 二二、、流程及主要部件流程及主要部件 三、三、影响分离的因素影响分离的因素 三三、、影响分离的因素影响分离的因素 四、四、高效液相色谱法的主要分离类型高效液相色谱法的主要分离类型 四四、、高效液相色谱法的主要分离类型高效液相色谱法的主要分离类型 概述概述 概述概述 高效液相色谱法高效液相色谱法 （HPLC（HPLC））是是2020世纪世纪6060 高效液相色谱法高效液相色谱法 （（HPLCHPLC ））是是2020世纪世纪6060 年代末年代末70年代初发展起来的一种新型分离70年代初发展起来的一种新型分离 年代末年代末7070年代初发展起来的一种新型分离年代初发展起来的一种新型分离 分析技术分析技术，随着不断改进与发展，随着不断改进与发展，目前已， 目前已 分析技术分析技术，，随着不断改进与发展随着不断改进与发展，， 目前已目前已 成为应用极为广泛的化学分离分析的重要成为应用极为广泛的化学分离分析的重要 成为应用极为广泛的化学分离分析的重要成为应用极为广泛的化学分离分析的重要 手段手段 。。 手段手段 。。 一、一、液相色谱分离原理及分类液相色谱分离原理及分类 一一、、液相色谱分离原理及分类液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样和气相色谱一样，液相色谱分离系统也，液相色谱分离系统也 和气相色谱一样和气相色谱一样，，液相色谱分离系统也液相色谱分离系统也 由两相由两相—— 固定相和流动相组成固定相和流动相组成。。液相液相 由两相由两相 固定相和流动相组成固定相和流动相组成。。液相液相 色谱的固定相可以是吸附剂色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合、化学键合 色谱的固定相可以是吸附剂色谱的固定相可以是吸附剂、、化学键合化学键合 固定相固定相 （或在惰性载体表面涂上一层液（或在惰性载体表面涂上一层液 固定相固定相 （（或在惰性载体表面涂上一层液或在惰性载体表面涂上一层液 膜）、膜 ）、离子交换树脂或多孔性凝胶离子交换树脂或多孔性凝胶；流；流 膜膜 ）、）、离子交换树脂或多孔性凝胶离子交换树脂或多孔性凝胶；；流流 动相是各种溶剂动相是各种溶剂 。。 动相是各种溶剂动相是各种溶剂 。。 被分离混合物由流动相液体推动进被分离混合物由流动相液体推动进 被分离混合物由流动相液体推动进被分离混合物由流动相液体推动进 入色谱柱入色谱柱 。根据。根据各组分在固定相及流动各组分在固定相及流动 入色谱柱入色谱柱 。。根据根据各组分在固定相及流动各组分在固定相及流动 相中的吸附能力相中的吸附能力、分配系数、分配系数、离子交换、离子交换 相中的吸附能力相中的吸附能力、、分配系数分配系数、、离子交换离子交换 作用或分子尺寸大小的差异进行分离作用或分子尺寸大小的差异进行分离。。 作用或分子尺寸大小的差异进行分离作用或分子尺寸大小的差异进行分离。。 色谱分离的实质色谱分离的实质是样品分子是样品分子 （以下称（以下称 色谱分离的实质色谱分离的实质是样品分子是样品分子 （（以下称以下称 溶质溶质 ）与溶）与溶剂（剂 （即流动相或洗脱液即流动相或洗脱液）以）以 溶质溶质 ））与溶与溶剂剂 （（即流动相或洗脱液即流动相或洗脱液））以以 及固定相分子间的作用及固定相分子间的作用，作用力的大，作用力的大 及固定相分子间的作用及固定相分子间的作用，，作用力的大作用力的大 小，小，决定色谱过程的保留行为决定色谱过程的保留行为。。 小小，，决定色谱过程的保留行为决定色谱过程的保留行为。。 根据分离机制不同根据分离机制不同，液相色谱可分，液相色谱可分 根据分离机制不同根据分离机制不同，，液相色谱可分液相色谱可分 为：为：液固吸附色谱液固吸附色谱、液液分配色谱、液液分配色谱、化、化 为为：：液固吸附色谱液固吸附色谱、、液液分配色谱液液分配色