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饲料中氨基酸的测定 黎观红 江西农业大学动物科技学院 6 饲料中氨基酸的测定(教材P106) 氨基酸是组成蛋白质的基本结构单位，也是蛋白质的分解产物； 蛋白质营养——氨基酸营养（不是很确切，小肽营养）； 理想蛋白或理想氨基酸模式（畜禽日粮的氨基酸平衡理论） ——饲料蛋白质营养价值评定。 6 饲料中氨基酸的测定 6 饲料中氨基酸的测定 饲料中氨基酸的测定(教材P120-131) 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换层析法） 氨基酸自动分析仪：主要由日本（Hitachi日立系列产品）、美国（贝克曼（Beckman）公司）、英国（安玛西亚公司）、德国（安米诺西斯公司）等国家生产。 氨基酸测定专用仪器，准确度高，设备昂贵。 L-8900氨基酸自动分析仪的内部结构 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法） （一）测定原理 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法） （一）测定原理 氨基酸的分离（离子交换树脂分离）： A、离子交换层析（ Ion Exchange Chromatography ）基本原理 以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式。 饲料中氨基酸的测定 A、离子交换层析基本原理 饲料中氨基酸的测定 RA+B＋ RB＋A+(RA是阳离子交换剂，B为溶液中的离子或待分离的生物分子） 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法） （一）测定原理 B、氨基酸的分离（离子交换树脂分离） 氨基酸：两性电解质，不同氨基酸电离常数各不相同。pH、pI 氨基酸pH2.2 的条件下都带正电荷，在阳离子交换树脂上均 在被吸附，但结合强度各不相同。 随着缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断地吸附、解吸附，由于氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小） 吸附强度有差异。 不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同： 碱性氨基酸 芳香族氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸及羟基氨基酸。 提高流动相pH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱上洗脱下来。 洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。 氨基酸标准液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺 序一定，标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定，由此可计算出样品中各种氨基酸的含量。 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法） （一）测定原理 B、氨基酸的洗脱 分离后的氨基酸与茚三酮试剂在高温反应器中进行衍生反应，生成可以被分光光度计检测的有色物质，然后在检测器中被检测出来。 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法） （一）蛋白质的水解 A、盐酸水解（常规或直接水解法） 适用范围：饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中除色氨酸、含硫氨基酸以外的15种氨基酸的准确测定。（为什么是15种？） 样品加入6 mol/L的HCl溶液，真空封口，在110℃下水解22～24 h，冷却后定容、过滤、蒸干。上机测定。 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法） （一）蛋白质的水解 B、氧化－酸水解 氧化水解法是将饲料蛋白中的含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等)用过甲酸氧化，然后进行酸解生成磺基丙氨酸和蛋氨酸砜，再经离子交换色谱分离、测定。 本方法主要适用于含硫氨基酸（胱氨酸和蛋氨酸）的准确分析测定。此方法还可以测定芳香族氨基酸（酪氨酸和苯丙氨酸）及组氨酸以外的氨基酸。 水解中色氨酸破坏，不能测定。 酪氨酸在以偏重亚硫酸钠做氧化终止剂时，被氧化，不能测准。 酪氨酸、苯丙氨酸和组氨酸则在以氢溴酸作终止剂时被氧化，不能测准。 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法） （一）蛋白质的水解 C、碱水解 本方法适用于饲料原料、配合饲料和浓缩饲料中色氨酸的测定。 饲料蛋白在110℃，碱的作用下水解，水解出的色氨酸可用离子交换色谱或高效反相色谱分离、测定。 另： 分光光度法测定饲料中的色氨酸：饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氨酸吲哚环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。 饲料中氨基酸的测定 6.3 氨基酸自动分析