TLC方法同时监测生物转化过程中的阿魏酸、香草酸和香草醛.pdfVIP

维普资讯 第24卷第 1期 郑州工程 学院学报 Vo1．24．No．1 2003年 3月 JournalofZhengzhouInstituteofTechnology Mar．2003 文章编号 ：1671—1629(2003)01—0035—03 TLC方法 同时监测生物转化过程 中的 阿魏酸 、香草酸和香草醛 李永红，郑志强，孙志浩 (江南大学 生物工程学院生物化工系，教育部工业生物技术重点实验室，江苏 无锡 214036) 摘要 ：采用薄层扫描法(TLC)，以正 己烷．氯仿．无水 乙醚．冰醋酸 (体积分数 比为 4：3：2：0．1)为 展开剂，碘蒸气为显色剂可以同时测定发酵液 中阿魏酸 、香草酸和香草醛 的含量 ．用 2，4．二硝 基苯肼显色可以专一性地测定香草醛 ．用碘蒸气显色时阿魏酸 、香草酸和香草醛的线性范围均 为 1～10 g，标准 曲线分别为 Y=353．3 一183．2，R =0．9954；Y=308．0x一42．0，R =0．997 9；Y=655．11 一49．0，R =0．9954．平均 回收率分别为 101．3％，101．8％，103．0％，RSD分别为 2．39％，2．39％，2．24％．用2，4-二硝基苯肼显色时香草醛的灵敏度更高，线性范围为 1～5 g， 标准曲线分别为 Y=6843．6 一4776，R =0．9922．两种显色方法测得 的香草醛结果一致 ． 关键词 ：阿魏酸 ；香草酸；香草醛；TLC 中图分类号 ：TQ920．1 文献标识码 ：B 香草醛 (Vanillin，Vin)是食 品、饮料等工业 中 津)；微量点样器 (由微量进样器改制)． 应用最广泛的香料之一 ，还可作为保鲜剂及 医药 1．2 试剂 等工业的原材料 ．香草醛 目前主要 由化学方法合 阿魏酸 (Sigma公 司)，香草酸 (Sigma公 司)，硅 成制备 ．天然香草醛从香子兰的花荚中提取 ，但这 胶 G(中国青 岛海洋化工集 团公司)，香草醛及其 样得到的香草醛价格 昂贵 ．根据美国和欧盟 的规 它试剂 ，均为分析纯 ． 定 ，合成香草醛在农产品和食品添加剂 中的使用 会引起法律方面的争议 ¨，再加上消费者的喜好 ， 2 方法与结果 更促进了生物技术方法生产香草醛的研究 ．生物 转化法生产香草醛 多采用 阿魏酸 (Ferulicacid， 2．1 薄层条件及分离处理 FA)作为前体物质 ，中间会产生香草酸 (Vanillic 2．1．1 薄层条件 acid，VA)等中间产物 ．因此 ，为了进行菌种选育和 薄层板的制备 ：在硅胶 G6。中加适量质量分数 代谢途径研究很有必要创建一种能迅速地 同时测 为0．5％ CMC．Na溶液混合 、研匀后铺 于 20cm × 定阿魏酸 、香草酸和香草醛的方法 ，薄层扫描法正 20cm玻璃板上 ，室温下干燥 ，105oC活化30min后 好具备快速 、方便 的特点 ，可用于代谢途径 的监 置于干燥器 中备用 ． 测 ． 展开剂：正己烷一氯仿一无水 乙醚．冰醋酸 (体积 分数 比为 4：3：2：0．1)． 1 仪器与试剂 显色剂：碘蒸气结合 2，4-二硝基苯肼 ． 扫描条件 ：228nm单波长反射矩齿扫描 ．狭 1．1 仪器 缝 0．4mm×0．4mm，SX=3，灵敏度中等 ． CS9301(PC)S型双波长飞点扫描仪 (日本 岛 2．1．2 分 离结果