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具有高外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ活力的新型黄单胞工程菌的构建 Construction of Novel Engineer
遗传 HEREDITAS(Beijing)19(5):37一401997
具有高外切葡聚糖纤维二糖水解酶I活力的
新型黄单胞工程菌的构建
王春卉 汪天虹 高培基 钟 玲
山（东大学生命科学学院微生物系、济南 250100)
摘 要 由广宿主质粒pRK404和微紫青霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶I(CBHI)cDNA基因。bhI构建了
重组质粒pRK404-181，在携带有诱动质粒的菌株ED8654(pRK2013)的存在下，采用三亲滤膜结合的方
法，将该质粒转移到野油菜黄单胞菌S-152中并成功地得到表达。结合子S-152(pRK404-181）外切葡
聚糖纤维二糖水解酶的pNPC活力比原始菌株S-152提高了2-4倍，滤纸酶活提高了1倍。
关键词 接合转移，微紫青霉，野油莱黄单胞菌，外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因
ConstructionofNovelEngineeringXanthomonaswith
HigherCellubiohydrolaseIActivity
WangChunhuiWangTianhong GaoPeijiZhongLing
(MicrobiologyDepartment,TheCollegeofLifeScience,ShandongUniversity,linan 250100)
Abstract RecombinantplasmidpRK404-181wasconstructedwiththewide-host-rangeplasmid
pRK404andthecellubiohydrolaseI(cbh1)geneofPenicilliumjanthinellum.Thisplasmidwastransferred
intoXanthomonascampestrisS-152withtheaidofhelperplasmidpRK2013.Asaresult,theintracellular
cellubiohydrolaseactivityofS-152(pRK404-181）nicreased2一4time,andthefilterpaperdegradingac-
tivityincreased1timeincomparisonwiththeinitialbacterialXanthomonascampestrisS-152
KeywordsConjugation,Penicilliumjanthinellum,Xanthomonascampestris,Geneo#cellubiohydrolase
纤维素是生物界中最重要的碳源物质，对纤维素生物降解的研究已有几十年的历史。近年来，随着分子生物
学、遗传工程的迅速发展，已开始应用重组 DNA技术改造纤维素酶产生菌的特性。野生的野油菜黄单胞菌
(Xanthomonascampestris)S-152是我所自己筛选的一株纤维素分解菌，革兰氏阴性，可利用玉米淀粉生产胞外多
糖一一一演原胶，其产品具有广泛的应用价值 ”〔。该菌具内切葡聚搪酶和价葡萄糖昔酶活力，但其外切葡聚糖酶
活力则较低。为了构建具有降解天然结晶纤维素能力的新型黄单胞菌，我们利用本室蔡勉等建立的野油菜黄单胞
菌S-152的遗传转移系统 ”〔，采用三亲滤膜接合转移的方法将从微紫青霉(Penicilliumjanthinellum）的cDNA库
中筛选克隆到的。bhI”基因转人该菌，提高了该菌的CBHI酶活力，多酶协同的滤纸酶活也得到了提高。
1材 料 与 方 法
1.1菌株与质粒
野油菜黄单胞菌 S-152由（本所提供）；大肠杆菌 JM109CrecA1supE44endAIhsdR17gyrA96relA1
thi(lac-proAB))；带有微紫青霉cbhI基因的质粒pUC18-181由（德国汉堡大学的AnkeKoch博士惠赠）；带有诱
动质粒的大肠杆菌ED8654(pRK2013)，卡那霉素抗性；带有广宿主质粒pRK404的菌株JM83(pRK404)141，四
38 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1997 19卷
环素抗性。
1.2限制性内切酶及主要试剂
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