盆放免技术分析McD3Ab3与肺腺癌细胞株的体外结合特性.pdfVIP

7—2-7 蔫。‰ 。 。嚣 盆 放免技术分析McAb3D3与肺腺癌细胞株的体外结合特性 趣羔三芝 苏金华 郑 耘 (厦门大学抗癌研窆中 心，厦 36]005) 俞 浩 直 荣宗 7{4 2磅 — — — — — 一 (厦门市第一医院同位索宣，厦 门 36J005) A摘 要 本文利51氟胺T碘标技术对肺癌单抗 (McAb3D3)体外结合特性 进行 分析，MeAb3D3与肺腺癌细胞株 L342的结合常数为3．2x10。otol_。，每个L342 细胞表面 MeAb3D3的平均结合位．最数为2．5x10个。RIA观 察各种处理 因素对 L342m胞表 面结合位点与 ¨ I—Mcab3D3结合抑制率的影响， 1 Na104、O．2 蛋 白酶K、100％甲醇和100％丙酮 的结合抑制率分别 为72％、46 、14％和16％。 结果提示 ，McAb3D3所对 时的3D3抗 原是一种 糖蛋 白。 — ’～ 关量词 肺癌；抗体』璺塞堕；=鲤；呈A一结合特性 幅 单克隆抗体制备技术的创立为肿瘤分 予 Da一65型紫外分光光度仪 (Beckman)测定 生物学研究提供 了有利的工具。为 了更客观 蛋 白浓度。 地定量评价单抗在体 内外的定位，显像和细 1．2 氯胺T硬标法和碘标抗体的 特性鉴定 胞杀伤作用 ，有必要对单抗与抗原 的结合特 氯胺T碘标法参考文献 进 行．McAb3D3 性做深入了解。MeAb3D3是我室制备的一 投入量为 800 g，” I13．7mBq，0．4 氯胺 株抗人肺癌单克隆抗体 】，经 IFA和ABC Ti00 I反应 3min，偏重亚硫酸铺 终 止 反 染色法等实验证明，McAb3D3与肺腺癌细 应 。自身置换法 测定标记物 比放 射性， 胞株 A543、L342和肺腺癌组织有较强 的反 标准物浓度 4—256gg，双样管，每管加入 应性 ，而不 与正常组织反应。本文利用氯胺 一 定量 的抗体 ，标记物 的 浓 度 为 1 ×10 T碘标和放免分析技术对McAb3D3与L342 crop。 细胞株的结合特性作进一步研究，包括结合 1．3 碘标单抗免疫活性组分 r(r：Immu— 常数和细胞表面抗原位 点数测定等。 noreactivefraction)测定 按 Linodmo等 方法 … 进行 ，一定的 抗 体 浓 度 (2×10。 l 材料和方法 epm)与系列数量的靶细胞 (5×10．10， … … 32x10 )反应 ，以结合抗体百 分 率 的 1．1单抗的分离和纯化 MeAb3D3是一 鼠 倒数与细胞浓度 的例数作图，回归直线延 线 一 鼠杂交瘤分泌的 IgG1型抗体．即将杂交瘤 与Y轴的交点值的倒数即为理论上标记抗体 细胞接种于 BALB／c小 鼠腹腔产生腹水 ，以 免疫活性组分 。 硫酸铵一正辛酸祝淀法纯化单抗 。聚丙烯 1．4 结合常数K和抗躁位点鼓的剥 定 L342 蘸胺凝腔电泳鉴定其纯库，IFA辈定活检和 细胞表面能与McAb3D3结合 的抗原位点 l8 数和结合常数K的