超微结构与基本知识讲座 .ppt

一 、取材、样品制备与课题设计密切相关 取材前要问几个问题: a 所要研究对象的解剖位置是否清楚?如海马….肾小球病变. b 要观察样品的外部还是内部结构？＿取材和固定前的处理不同（ＴＥＭ／ＳＥＭ），如肠上皮、牙齿髓腔的观察．．． c 是定量还是定性？ d 有横/纵向之分吗? 肌肉﹑神经等 ２. 取材、固定 组织取材: 大小(1X1X5mm3)、部位(与要观察的对象有关) 原则:保证样品的超微结构不受损伤及细胞原有的定位. 注意事项:⑴切取组织动作要迅速; ⑵低温操作; ⑶取材用的刀具要锋利; ⑷组织块要切小; ⑸部位要准确可靠. (6)做好文案工作:标本编号、各项相关资料等 3.各类标本的取材 ①实体组织标本的收集 培养细胞:量的多少能做(培养瓶\孔板)；一般1mm3即可，１２或２４孔均可做ＴＥＭ／ＳＥＭ，其方法不同．ＳＥＭ细胞可更少． 二、超微结构观察与研究中值得注意的问题 1 、局部与整体的关系: EM下:极小的一部分,超薄切片获得的样品厚度只有一个细胞的几百分之一……必须同时进行大体和组织学的观察,才能获得全面的资料. 2 、静态和动态的关系:在常规电镜技术中,不能观察活细胞,故细胞结构是瞬间静态的图象,实际上,细胞是运动和变化,细胞超微结构也是动态的.防止单纯的形态描述。 3.半薄切片:补充上述缺陷. 生物样品的普通石蜡切片厚度为5微米左右,其观察深度远比超薄切片为大,即在石蜡切片和超薄切片之间不仅有观察范围大小的区别,也有观察厚度大小的显著差异.半薄切片厚度为1微米左右,一方面可为超薄切片定位,以选取电镜下观察部位,另一方面可供光镜观察标本的整体面貌. 通过LM 观察半薄切片可以检见通常在石蜡切片难以检见的形态结构,并据此可做出诊断.因为制作半薄切片的材料和技术操作过程不同于石蜡切片,而切片又较普通石蜡切片为薄,故其中某些组织成分得以较好保存和得以显示,有利于诊断. 4.电子显微镜的分辨本领虽已远胜于光学显微镜，但电镜因需在真空条件下工作，所以很难观察活的生物，而且电子束的照射也会使生物样品受到辐照损伤。其他的问题，如电子枪亮度和电子透镜质量的提高等问题也有待继续研究。 三、几类常见细胞的超微结构特征及鉴定 　　细胞是构成人体最基本的功能单位，人体的细胞有两百多种，其结构不同，功能不同结构与功能相联系，每种细胞、组织和器官都有一定的形态结构特点。这些特点往往是它们行使一定功能的结构基础，两者密切相关。 如：分泌蛋白质的腺细胞富有粗面内质网和发达的高尔基复合体，巨噬细胞则有较多的溶酶体；构成肌组织的肌细胞，形态细长，含有大量纵行肌丝，是细胞收缩的物质基础；上皮组织则细胞排列紧密，具有吸收和保护等功能相关结构。又如消化管是连续的管道，而食管、胃、小肠和大肠的粘膜又各有特点，它们与各段的相应功能相关。因此，结构与功能相结合既能达到深入理解，融会贯通． １．神经元 神经组织由神经细胞和神经胶质细胞构成。神经细胞即为神经元，是神经系统的结构功能单位，可接受刺激，传递信息，有的还有内分泌功能。神经胶质起支持、营养、保护作用。 突分两类， 即轴突(axon)和树突(dendrite)，大多数神经元具有多个树突，每个树突都较短，分支较多，可扩大接受信息面积。 树突小分支表面有大量的细刺状突起，称为棘突或棘刺（spine）。 神经细胞（neuron）细胞质内有丰富粗面内质网及发达的高尔基体，细胞核大，常染色质及核仁均明显。粗面内质网与核糖体成片，异染色质少单个核仁均明显。 ２．血管内皮细胞 内皮为衬贴于血管腔单层扁平上皮。内皮细胞长轴多与血液流动方向一致，细胞核居中，核所在部位略隆起，细胞基底面附着于基板上。电镜观察，可见内皮细胞腔面有稀疏而大小不一的胞质突起，表面覆以厚约30～60nm的细胞衣，相邻细胞间有紧密连接和缝隙连接及10～20nm的间隙。内皮细胞核淡染，以常染色质为主，核仁大而明显。在胞质内有发达的高尔基复合体、粗面内质网和滑面内质网。 内皮细胞超微结构的主要特点是胞质中有丰富的吞饮小泡，或称质膜小泡（plasmalemmal vesicle），直径60～70nm（图）。这些小泡是由细胞游离面或基底面的细胞膜内凹形成，然后与细胞膜脱离，经细胞质移向对面，又与细胞膜融合，将小泡内所含物质放出，故小泡有向血管内外输物质的作用，细胞质内还可见成束的微丝和一种外包单位膜的杆状细胞器，长约3μm直径0.1～0.3μm，内有6～26条直径约15nm左右的平行细管，称Weibel-Palade小体（W-P小体）W-P小体是内皮细胞特有的细胞器