免疫组化技术简介和相关临床应用.ppt

免疫组化技术简介及相关临床应用 朱胜章 黔南州人民医院病理科 提 纲 背景知识简介 免疫组化技术是20世纪70年代初Sterb Berger在酶标法的基础上,以免疫学的抗原抗体反应为理论基础发展起来的一门方法学。 20世纪80年代该项技术在国外开始应用于诊断疾病，国内比国外约晚10年，即90年代开始运用于疾病的病理诊断。 最近20多年来，该项技术得到飞速发展，特别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石蜡切片上，因而大大促进了它在临床病理学上的应用。 从开始发展至今，该项技术一直在基础医学和临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性疾病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了强有力的手段。 目前绝大多数大中型医院都开展了该项技术检查，我院有待开展此项技术。 定义及基本原理 定义： 免疫组化，也称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术，是应用免疫学基本原理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。 基本原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。然后再通过化学显色方法将抗原抗体结合所在的部位显示出 来，从而达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。 有如下基本特点： 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合 所用抗体及标本类型 所用抗体类型 常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。 所用标本类型： 主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾 性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。 常用染色方法 免疫组织化学技术按照标记物的种类不同可分为： 1，免疫荧光法，标记物为荧光素，通过荧光显微镜观察； 2，免疫酶法，以酶标记抗体，抗原抗体反应后显色，通过光镜或电镜观察，目前最常用； 3，其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等。 操作步骤 流程简介如下： 常规石蜡切片→脱蜡→抗原修复（根据需要）→缓冲液冲洗（3min/2次）→室温下孵育5min→缓冲液冲洗（5min/2次）→室温下孵育5min →缓冲液冲洗（5min/2次）→滴加一抗37℃孵育1-2小时→缓冲液冲洗（5min/2次）→室温下孵育30分钟→滴加二抗室温下孵育1小时→缓冲液冲洗（5min/2次）→滴加DAB液→孵育3-5分钟→自来水充分冲洗→复染→脱水→透明→封片→出诊断。 结果判断（表达部位、检测物质及常用标记物） 表达部位： 细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核、细胞多部位及组织等； 检测物质： 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。 常用于肿瘤病理鉴别诊断的免疫标记物（举 例） 上皮组织：CK、EMA； 特异性上皮标记：如TG、 PSA，TTF－1等； 间叶组织：vinmentin； 肌组织：desmin、SMA、MSA、myosin、myogenin、myoD1； 血管内皮细胞：CD31、CD34、FVIIIRAg或FVIII； 组织细胞：CD68、Mac387、溶菌酶等； 神经内分泌： 1、激素标记物：儿茶酚胺、5－HT、多肽和肽释放因子等； 2、非激素标记物：NSE、CGA、Syn等； 神经组织： S－100、MBP、Leu7、NSE、GFAP 、NFP等； 淋巴造血组织：CD45（LCA）、CD20（L26）、 CD79a、CD3、