浅谈细胞培养中微生物污染与防控措施.pdfVIP

· · 广东畜牧兽医科技 2010 年( 第35 卷) 第4 期 经验交流 49 浅谈细胞培养中微生物污染与防控措施 * 陈 峥 ，赖月辉，陈振荣 （广东永顺生物制药有限公司，广东 广州 511356） 中图分类号 + 文献标识码 A 文章编号 ： S854.43 ： ： 预防细胞培养的微生物污染是指在细胞培养 生长可证明该细胞受到了细菌的污染。 过程中，细菌、霉菌或病毒等微生物侵入细胞培养 1.2 支原体污染 支原体污染不能用肉眼或光 物中，对细胞的生存造成危害的现象。在生物制品 学显微镜检查细胞观察出来，带有一定的隐蔽性， 的生产和研究等相关的细胞培养过程中，由于细 易被人们忽视。当细胞被支原体污染后，细胞营养 胞培养的特殊性和培养条件要求高，若受到微生 液可能毫无变化，短期内细胞没有明显的病理变 物的污染，这将对实验或生物制品生产带来了严 化，也可以因为传代或换液而缓解。只有当污染严 [2] 重的危害。 重时才影响细胞增殖，使细胞脱落 。支原体可以 为防止细胞培养过程中受到其他微生物污 与宿主细胞形成一个共生关系，使污染不断扩大。 染，首先应该从污染途径检查，对可能造成污染的 一旦发生支原体污染，支原体可以通过移液、倾倒 每个环节和步骤制定严格的消毒措施；其次判断 液体时产生具有潜在感染力的飞沫和吸附的尘 污染的类型，对不同的污染类型采用提纯细胞群、 埃，沉积在物体表面。这种污染性尘埃能存活数天 添加抗生素等措施加以处理和预防。同时制定严 甚至数周，使操作环境受到污染，若不及时处理还 格的操作规范以保证污染可以早预防、早发现、早 会产生交叉污染或再次污染。支原体污染常用的 处理。 检查方法为培养检测法，即取1 mL细胞培养液加 1 污染类型 入支原体液体培养基中，培养5天后，观察培养基 1.1 细菌污染 细胞培养中细菌污染较为常见。 的颜色变化。如果变黄则怀疑该细胞受到支原体 主要是由于操作不当或是器材消毒不严，或是各 污染。如果不变色，则盲传一代。若颜色变黄，可接 种营养成分隐性污染细菌没有被检测出来所造成 支原体固体培养基，于5%CO培养箱中培养3～5 2 的。即使在细胞培养液中加入了抗菌素，使得细菌 天，观察有无“煎蛋”状支原体菌落。一旦发生污染 繁殖处于抑制状态，细胞生长不受明显影响，不易 即淘汰该细胞和培养液。此外，支原体污染还可用 [1] [3] 被肉眼观察。但随着抗生素的失效，营养液中的细 荧光染色法 和相差显微镜观察法 等检测方法。 [1] 1.3 霉