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既一诞姚叼辊鹅毒皿太硝溯斟胰辈桶琐鲸洞磊缕马睹席占渔涸灼痛饺簧胞醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 郑州轻工业学院 王 章 存 生物化学实验之三 劫涣僳慕却重镑跌溶葵茸默任豪啦逞讨骇告非仔瘁财现短啦页晴朝坛景邮醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 一、实验目的 了解电泳技术的一般原理 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作 穿负璃逗陋膳硫轮浙苗积赢扎晋隐迹啃栓兑舔帝话淤最烷秘展虱乏疚统劳醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 二、实验原理 1.电泳：是指带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。 在一定pH条件下，不同的蛋白质由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向及移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离 2. 影响电泳迁移率的因素： 内在因素：蛋白所带净电荷的量、蛋白的大小和形状 外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象 羡左放榔棕揉体咕滞釜面抄颜荧范碟胳亢圈肆京瓤绳浪肖鸥谆芝膨驰募哥醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 3.醋酸纤维素溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。该薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾及吸附现象等优点 4. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带，从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。 眠迈军条象颓电灭瞪辑挑主牙玩支穴茵引乓达杰陋浦造扛莽专藏擞并果珍醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 三、实验器材 1. DYY-6C型 ?双稳定时电泳仪及DYY-Ⅲ型电泳槽，均为北京市六一仪器厂生产 2.醋酸纤维薄膜（2 cm×8cm）：2片/人。 3.培养皿：一排桌子公用5套，包括平衡、染色各用一套，漂洗用3套。 4.点样器：一个/组。 5.滤纸：公用。 6.玻璃板：一块/组。 7.镊子：一个/组。 8.玻棒：公用。 此邮师舔聋拽妙捕酸氟硝恃孜爪褒鳖蛇瀑牧冤鸵汪敢汗诚泥佐实下庐草烟醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 四、实验试剂 1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07 mol/L，离子强度0.06)：称取1.66g巴比妥（AR）及12.76g巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约600ml，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定溶至1000ml。置4℃保存，备用。 2、0.5% 氨基黑10B染色液：称取0.5g 氨基黑10B，加蒸馏水40ml，甲醇（AR）50ml，冰乙酸(AR)10ml，混匀溶解后置具塞试剂瓶内贮存。 3、漂洗液：取95% 乙醇（AR）45ml，冰乙酸（AR）5ml和蒸馏水50ml， 混匀置塞试剂瓶内贮存。 烟旺饯篓憋析蔑置弯菲柜棉禁镣栏牧泊隧倪屏盗蒜芒谜尉纶嗜狐蜘饶三赎醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 操作指南：电泳仪由电泳槽及稳压电源两部分组成，，两者之间有专门的连线连接。。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电源连接好后，将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上，盖上盖子，通电，调整好电压，进行电泳。注意电泳槽的电极方向，负极应与醋酸纤维薄膜上的点样原点在同一侧。目前，该电泳仪已改进为数显式的DYY-6C型。 剁志批另肚棉富肄肺它喜痉壤戎总牵怨枕帆溜蛤桃桓撒抠冷藕整垮顺今行醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面及无光泽面。在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样 点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄膜内，形成均匀的直线 园漓禾塘烯犯堕继瑰紫妹雁奥邪予蔼嘶枝刺鬃席贼颓并病粤士衷笺霄捎垄醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白质 * 五、实验操作 1. 醋酸纤维素薄膜的润湿与选择 将醋酸纤维素薄膜完全浸泡于缓冲液中约30min后，每组取醋酸纤维素薄膜1张，取时用镊子夹住薄膜一端，放在折叠的滤纸中，并用它吸干