新型CD20核酸适配体的筛选及鉴定.pdfVIP

2014年 5月 基础医学与临床 Mav2014 第 34卷 第5期 Basic＆ ClinicalMedicine Vo1．34 No．5 文章编号：1001-6325(2014)05-0628—05 研 究 论 文 新型CD20核酸适配体的筛选及鉴定 张李钰’，胡 燕 ，曹蓓蓓 ，段金虹 ，刘 枯 ，杨先达 (1．中国医学科学院基础医学研究所 病理生理系，北京 100005； 2．北京协和医学院北京协和医院 临床遗传学实验室，北京 100005) 摘要：目的研发能特异性识别CD20分子的DNA适配体，使其作为肿瘤靶向分子为非霍奇金淋巴瘤的新型靶向 治疗提供依据。方法 体外合成含有21个随机寡核苷酸 、全长为59个碱基的DNA文库，以CD20胞外表位肽为靶 标，利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)，从文库中筛选CD20适配体；利用流式细胞术评估适配体的富集 程度 、适配休 与CD20多肽，适配体与CD20阳性细胞的结合特性 ；用MFold软件预测适 体预计结构。结果 经多 轮筛选获得了能识别 CD20结构的全新DNA适配体 CFA一1；它能特异性地识别CD20；}『{性淋巴瘤细胞，与 “蛋白及 CD20阴性细胞的结合较弱 ，与经胰蛋白酶处理的CD20阳性细胞的结合也减弱。结论 该新刑适配体能选择性识 别CD20结构及CD20阳性细胞，在CD20阳性淋巴瘤的靶向诊疗方面具有应用潜能。 关键词：适配体；SEtEX；CD20 中图分类号：R733．7 文献标志码 ：A SelectionandidentificationofanovelDNA aptameragainstCD20molecule ZHANGLi—yu ，HUYan ，CAO Bei．bei，DUANJin．hong，LIUZhe，YANG Xian—da’ (1．Dept．ofPhysiologyandPathophsiology，InstituteofBasicMedicalSciences，CAMS＆PUMC，Beijing100005； 2．LaboratoryofClinicalGenetics，PekingUnionMedicalCollegeHospital，CAMSPUMC，Beijing100005，China) Abstract：Objective TodevelopaCD20aptamerthatmaypotentiallyserveasatumor—homingligandfortargeted therapyagainstnon—Hodgkin’Slymphoma(NHL)．Methods Asingle—stranded59ntDNAlibrarycontaining21nt random o1ig0nucleotideswassynthesized．A new CD20 aptamertermedCE4—1wasdevelopedwith SELEX tech— nique，usingaCD20 epitopeasthetarget．Flow cytometry wasperformedtomonitortheenrichmentoftheselected DNA pool，andthebindingpropertiesofCE4—1towardsCD20 structureandCD20一positivecells．Thestructureof CE4—1waspredictedbyMFold software．Results TheDNA aptamerCE4—1could selectivelybindwith CD20 structureand CD20一positivecells，with minimalcrossreactivity toBSA and CD20一negative cells．Additionally，