新型亲和去垢小柱净化-液相色谱-串联质谱法分析水稻叶片蛋白质组.pdfVIP

20I4年 l1门 色巳 谱1旨 Vo1．32No．1l November2014 ChineseJournalofChromatography l181～1l86 研 究论 文 DOI：10．3724／SP．J．II23，20l4．06035 摘要 ：采JIJ亲币l1 垢小牲净化 ，缱立丁水桶叶片篮rI质组的纳升液卡}】色 一 联质 分析力’法 、水稻叶片蟹rl质分 圳采川惭捉收法结合 l二‘烷坫硫酸钠 (sodium dodecylsulfate，SDS)裂解 ．裂解液 米和 垢小朴净化，胁斛肽段 Ⅲ纳外液相色瀚一线性离 r阱 ／静电场轨道阱组合 高分辨质谱(nanoLC—LTQ／OrbitrapMS)分析 ，相关数据席检索 鉴定 比较 了趟滤辅助样II^；ti0衍法 (rASP法)、东干¨去垢小 法和丙 })C淀法埘 SDS去除效 及 时蛋 I1质捺I定结 的影响 结 mJ：3种办法均有较好 的SDS 除效 ( 除效率均人 J95％)； 符 3种 法鉴定 的 白质种 炎 f一定的 f补rI-，但 以 和去垢小 法鉴定 的货 白质数}I=I坡 多 ， 563利-，远 多f FASP法和I内削沉淀法 的 196f1l306种；此外 ，亲和 圻小柱法通 丁各利·卡¨埘分子质f和小同pIf『蛋【 白质n勺净化 ，ffifFASP法 f1I阿 沉淀 法q一小 卡II埘分 质景和 pI值蛋 白质均 彳『类似 度 的损火 采用小 史建 的办法 ，一次进样分忻可搭定}{J水稻 叶片 l，1质多达 588种 ；从段 配数 ≥2的 296个 质的 物学功能 婴分为结合活性 、脯活性 、转移运输活性 和 ={f=『成等 陔蛋fL{质分析方法 町为 l，F腱水桶 质组 研究提供技术参考 。 关键词 ：亲和上垢小件 ；纳升液卡H色谱一线 ：离 r阱 ／ I场轨道阱组合』℃I膏分辨质游； 枪法 ；篮h质组 ：；水稻叶 片 ；l‘●烷 丛硫 般钠 中图分类号 ：O658 文献标识码 ：A 文章编号 ：l000—87l3(20l4)I1一l18I_()6 Abstract：A purification method wasestablished fortheanalysisofproteoines in riceleaves basedonanoveldetergentremovalspincolumn (DRSC)．Theproteinswereextractedbyphe— nolproteinextractionmethodfollowedbysodium dodecylsulfate (SDS)lysis．Thelysatewas purifiedbythedetergentremovalspin column and theenzymolytic peptideswere detectedby thenanoflow liquid chromatography—hybrid lineartrap quadrupole orbitrap mass spectrometry (nanoLC—LTQ／Orbitrap)．In termsofSDSremovalefficienciesandprotein identification，the methodofDRSCwascomparedwiththoseoffilteraidedsamplepreparation (rASP)andace— toneprecipitation．Asaresult，thereweregoodefficiencies (95％)ofSDSremovalforthe threemethods．W iththeDRSC purificationstrategy，563proteinswereidentifiedfrom riceleav— es，whileonly