脉冲场凝胶电泳技术.ppt

脉冲场凝胶电泳技术 生科院遗传学 胡银松 脉冲场凝脉电泳 (Pulsed field gelelectrophoresis,PFGE), 是近年发展起来的一种重要的分离大分子量线性DNA分子的电泳技术。 普通的琼脂糖凝胶电泳分离DNA分子的上限 是50 kb 大于该极限的DNA分子,常规的琼脂糖凝胶便失去了其分子筛的作用,导致电泳带型无法 分辨，PFGE的发明正好解决了这一问题。 1984年, Schwartz和Cantor首次用此技术成功分离得到酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)细胞的16条完整染色体DNA。 此后,随着PFGE技术的不断改进,现已具有分辨出高达10Mb级DNA的能力。 这一独具的高分辨力使PFGE的应用范围已涉及到几乎所有生物基因组结构的研究。 PFGE的基本原理是对琼脂糖凝胶外加交变的脉冲电场, 其方向、时间和电流大小交替改变,每当电场方向发生改 变时,大分子DNA便滞留在凝胶孔内,直至沿新的电场轴重 新定向后,才能继续向前泳动,DNA分子越大,这种重新定向 需要的时间就越长,当DNA分子改变方向的时间小于脉冲 时间时,DNA就可以按照其分子量大小分开,经EB染色后 在凝胶上出现按DNA大小排列的电泳带型。 PFGE的方法 常规的DNA制备方法得不到完整的大分子量DNA,因为DNA大片段很脆弱,容易因提