细胞生物学试验-湖北大学生命科学学院.DOC

附件3 湖北大学 细胞生物学 （课程代码） 实验教学大纲 （第2版） 生命科学学院 生物学实验教学中心 2010年7月 前 言 课程名称：细胞生物学 实验学时：48 适用专业：生物科学；生物技术；生物工程 课程性质：专业基础必修 一、实验课程简介 二、课程目的 细胞生物学作为一门实践性很强的学科，现今每项新成果的取得均离不开实验；实验教学是该专业课程的重要组成部分，通过实验技能、方法的学习和掌握，可以使同学们更好地领会认识其实践的重要性和必要性，从而更好地培养提高学生的独立动手能力和实践能力。 四、实验指导书及主要参考书 杨汉民 主编 细胞生物学实验指导 高等教育出版社 第二版 五、实验项目 实验项目一览表 序号 实验项目名称 实验类型 实验学时 必做/选做 实验一 特殊光学显微镜的结构与使用 综合 4 必做 实验二 细胞核和线粒体的分级分离及荧光检测 综合 4 必做 实验三 细胞膜的渗透性及凝集现象观察与分析 验证 4 必做 实验四 细胞大小的测定和显微细胞电泳 综合 4 必做 实验五 青蛙骨髓染色体的制备与观察 综合 5 必做 实验六 FEULGEN染色观察植物有丝分裂 综合 3 必做 实验七 植物原生质的无菌分离，培养与融合实验 创新 6 必做 实验八 细胞骨架光学及荧光观察 综合 4 必做 实验九 动物细胞的传代培养及观察 综合 4 必做 实验十 HELA细胞PCD诱导及检测 综合 4 必做 实验十一 细胞与生命 设计创新 6 必做 合计 48 实验类型：演示性、验证性、综合性、设计性、其它 实验一 特殊光学显微镜的结构与使用实验目的： 1.掌握四种特殊光学显微镜的特殊部件； 2掌握四种特殊光学显微镜的使用方法和用途； 3.熟悉四种特殊光学显微镜的基本结构。?? 1.四种特殊光学显微镜特殊部件的构造及调节???2四种特殊光学显微镜的使用及注意事项?? 3四种特殊光学显微镜的用途???4使用四种特殊光学显微镜实验目的： 掌握细胞器分离的原理；?熟悉细胞器分离的方法。内容制备细胞匀浆? ?2差速离心? ?3分离物鉴定实验目的：?? 1.掌握原理；2.掌握绘图方法；???3熟悉；掌握凝集素细胞凝集的原理 5.掌握绘图方法???6.掌握凝集素对细胞凝集的特异性。??实验内容取材去皮土豆制备凝集素粗提液鸡和兔红细胞悬液制备凝集素粗提液与鸡和兔红细胞悬液各一滴，静置20分钟镜检 实验要求： 设备器材准备：离心机，显微镜 操作要求：2人一组，独立完成实验及实验报告。 实验六 FEULGEN染色观察植物有丝分裂 实验类型：综合型 实验目的： 1．掌握细胞内DNA的观察方法 2．了界DNA在细胞中的分布 实验内容： 1．萌发根尖，根尖固定。 2．盐酸水解(1mol/L,60度水浴,7或者15分钟)，水洗3次。 3．染色(Schiff,黑暗条件染色,20-25分钟) 4．压片(45%醋酸或者蒸馏水) 5．观察 实验要求： 设备器材准备：恒温水浴锅，显微镜，光照培养箱 操作要求：2人一组，独立完成实验及实验报告。 实验七 植物原生质的无菌分离，培养与融合实验 实验类型：创新综合型 实验目的： 1.掌握原生质的概念，分离原理以及方法。 2.掌握原生质体培养的基本流程以及具体方法。 3.掌握原生质体融合的原理，方法，以及具体步骤。 实验内容： 1. 酶解法分离植物细胞 。 2. 原生质体的纯化。 3. 分离新鲜原生质体的培养与观察。 4 融合细胞的培养与观察。 实验要求： 设备器材准备：恒温培养箱，光照培养箱，灭菌锅，超静工作台 操作要求：2人一组，独立完成实验及实验报告。 实验八 动物细胞的传代培养及观察 实验类型：综合型 实验目的： 1. 掌握动物细胞培养的目的以及意义。 2．掌握细胞培养的具体步骤以及操作方法。 实验内容： 1．取材，实验工具，操作台以及实验动物的消毒 2．培养材料的制备 3．接种培养A.植块培养；B分散细胞培养 4．观察 实验要求： 设备器材准备：超净工作台，高压灭菌锅，培养室，离心机，CO2培养箱。 操作要求：2人一组，独立完成实验及实验报告。 实验九 细胞骨架荧光观察 实验类型：综合型 实验目的： 1.掌握用考马斯亮蓝R250（Coomassie blue R250）染色法观察植物细胞骨架的方法。 2. 细胞微丝的特异荧光观察。 3. 掌握细胞骨架的分布状态以及主要功能 实验内容： 光学观察： 1．撕取洋葱鳞茎内表皮置于pH6.8磷酸缓冲液中润湿； 2.用1%Triton X-100处理 3.3%戊二醛固定40 min； 4.0.2%考马斯亮蓝R250染色15分钟，然后用蒸馏水