唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca2+钙调蛋白赖性蛋白激酶Ⅱ与钙调蛋白结合及下游基因表达的影响.pdfVIP

2Q!!，yQ!：§2，盟!：2 虫堡旦膣医堂苤盍2Q12生2旦筮52鲞箜2期￡丛!』S!!里!!!!：E￡b型ag ．论著． 唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca2+／钙调蛋白 依赖性蛋白激酶Ⅱ与钙调蛋白结合 及下游基因表达的影响 王会董伟戚孟春孙红冯晓洁 温黎明 063000河北唐山，华北理工大学口腔医学院口腔颌面外科教研室(王会、董伟、戚孟春、 冯晓洁、温黎明)；063000河北唐山，华北理工大学基础医学院病理教,ef-室(孙红) 通信作者：戚孟春，Email：qimengchun@163．corn，电话：0315—3721508 DOI：10．3760／cma．j．issn．1002—0098．2017．02．014 【摘要】 目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中ca2+／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(ca2+／ kinaseⅡ，CaMK1I)与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1(nuclear calmodulin—dependentprotein ofT resistantacid factorofactivationcells一1，NFATcl)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate phosphatase， TRAP)基因表达的影响，探索其抑制破骨细胞分化的分子机制。方法将小鼠RAW264．7细胞分为 mm的培养皿中培养。A组(对照组)在NF．KB受体激 A、B两组，每组均以5×103个／；fL接种于直径为30 activatorofNF—KB 活蛋白配体(receptor ligand，RANKL)诱导下向破骨细胞形成，B组(唑来膦酸组)在 RANKL诱导培养1d后加用lxl0“mol／L唑来膦酸处理2d。应用免疫共沉淀(CO—immunoprecipitation， Co．IP)及反向co．IP对CaMKII与钙调蛋白的结合进行分析；应用蛋白质印迹法及免疫荧光细胞化学 检测两组NFATcl、TRAP蛋白表达，并对破骨细胞生成进行评价。结果B组新生多核破骨细胞数、 牙本质吸陷窝数和面积分别为(11．3±1．5)个、(8．7±2．1)个和(5034．4_+775．4)¨m2，均显著低于A组[分 042．7±1 别为(37．7±5．7)个、(23．0±4．0)个和(15906．0)trm2](P0．01)。Co—IP及反向co—IP检测屈示，B 组CaMKII与钙调蛋白的结合较A组分别显著下降了59．8％和50．9％(P0．叭)；在总蛋白中，B组钙调 较A组显著下降了52．4％和38．9％(P0．01)；免疫荧光化学检测也显示B组蛋白表达强度较A组弱。 11与钙调蛋白的结合，并下调下游NFATcl、 结论唑来膦酸可以显著抑制破骨细胞分化中CaMK TRAP的蛋白表达。 【关键词】钙．钙调蛋白依赖性蛋白激酶2； 钙调蛋白；唑来膦酸；免疫沉淀法 基金项目：国家自然科学基金；河北省高等学校科学技术研究计戈q(ZD2015005) on interactionbetween kinaseH Effectofzoledronate Ca2*／calmodulin—dependentprotein protein and ofdownstream osteoclastdifferentiation andcalmodulin genesduring WangHui，