应用MR氢谱检测大鼠脑胶质瘤C6细胞放射损伤.pdfVIP

·228- 物理·生物·技术· 应用MR氢谱检测大鼠脑胶质瘤C6细胞 放射损伤 李红霞 崔谊徐延杰 李福艳 史文琦王建震 曾庆师 250012山东大学齐鲁医院放射科 通信作者：曾庆师，Email：zengqsl234@sina．coin DOI：10．3760／cma．j．issn．1004—4221．2017．02．021 【摘要】 目的 应用高分辨率MR氢谱检测大鼠脑胶质瘤细胞系c6的放射损伤并初步探讨其 机制。方法以C6细胞为研究对象，应用MR氢谱检测细胞内多种代谢物浓度；彗星实验检测DNA 损伤；流式细胞术检测周期进程及凋亡率；克隆形成实验观察克隆形成率并初步探讨放射损伤作用机 制。采用单因素方差分析，Pearson法相关分析。结果照射剂量由0Gy增加为1、5、10、15Gy时， DNA损伤逐渐加重且有剂量依赖性(P=0．000～0．690)，G。期所占百分比显著增加(P=0．026 生堡墼盥贮堕堂盘查!!!!生!旦箜堑鲞笙!塑g垡!』垦!i堕Q!!!!：!!垒型!z!Q!!：!!!：堑：盟!：； 与细胞凋亡密切相关[4]。由化疗药物引起的脑胶 质瘤细胞凋亡、坏死率增加及G，期阻滞与细胞内代 干燥样品放于一20℃冰箱保存。 谢物存在一定相关性[3]，照射可引起细胞凋亡率增 4．MR氢谱测定：细胞内提取物在一20℃冰箱内 加，同时DNA损伤、周期阻滞加重口‘6】。我们最近的保存48h后取出，此时提取物外观呈乳白色、干燥、 研究证实肿瘤细胞内代谢物相对含量与细胞凋亡率 絮状。用精密微量天平称取提取物10mg，溶解于 存在一定相关性[7]。本研究旨在通过分析胶质瘤 600斗l4℃保存的重水(内标为TMSP)中，轻轻吹 打．待样品充分溶解后将溶液移人直径为5mm的 C6细胞照射后DNA损伤、周期阻滞与凋亡率的相 关性，探讨MR氢谱与DNA损伤、细胞凋亡的关系，核磁测试管内进行检测。MR氢谱检查采用 BRUKERAVANCE 从而为评价脑胶质瘤的放疗疗效提供一种无创性的 600型MR频谱仪，探头为超低 3 检测方法。 温探头，工作频率为600．1MHZ。扫描序列选用含 抑水脉冲的zgpr序列，机器自动匀场，扫描次数128 材料与方法 次，扫描时间1min。获取的氢质子频谱原始数据经 1．细胞系和主要试剂：大鼠脑胶质瘤C6细胞系 傅里叶转换．相位及基线校正之后得到频谱图像。 购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中 心。DMEM培养基和胰酶均购自美国HyClone公 的主要代谢物，如TMSP(0．00 ppm)、异亮氨酸 司；胎牛血清购自天津康源生物技术有限公司：培养 (isoleucine，Iso，1．23 细胞所用培养瓶及培养皿均购自美国Coming公 司；细胞冻存液二甲基亚砜(DMSO)购自DMSO 2．02 ppm)、琥珀酸(succinate，Suc，2．39ppm)、肌酸 CHINA CHEMICAL公司；400目细胞筛网购自德国 (creatine，Cr，3．03 Mihenyi公司：高氯酸溶液、氢氧化钾、重水(内标为 ppm)、肌醇(Myo．Inositol，MI，3．55ppm)等进行