免疫检测拟常用方法及运用秦伟.pptVIP

ELISA—双抗体夹心法 用特异性抗体进行包被和制备酶标抗体，以检测相应的抗原。 乙肝标志物中HBsAg、 HBeAg的检测常采用本法 ELISA—双抗体夹心法 ELISA—双抗体夹心法 ELISA—双抗原夹心法 用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 抗HBs的检测 抗HCV的检测 抗HIV的检测 ELISA—双抗原夹心法 ELISA—竞争法 标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。如受检标本中无抗体，则酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。加入酶标抗原后就显色深。如受检标本中含有抗体，则与酶标抗体以同样的机会与固相抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固相抗原结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。加入酶标抗原后就显色浅或不显色。 ELISA—竞争法 ELISA—竞争法 最常见的应用： 乙肝HBeAb、 HBcAb检测 ELISA—捕获法 （1）将抗人 IgM 抗体（抗人 IgM μ 链抗体）连接在固相载体上，形成固相抗人 IgM。 （2）加入标本， IgM 抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他抗体。 （3）加入特异性抗原试剂，它只与固相上的特异性 IgM 结合，洗涤。 （4）加入针对特异性抗原的酶标抗体，形成固相二抗 —IgM抗体—抗原 —酶标抗体复合物。 （5）加底物显色，如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性