选择性杀灭血液制品中病原微生物(病毒)得的研究方法介绍.pptVIP

选择性杀灭血液制品中病原微生物（病毒）的研究方法介绍 血液制品 血液制品是指各种人血浆蛋白制品，人血浆中有92%— 93%是水，仅有7% - 8%是蛋白质，血液制品就是从这部分蛋白质分离提纯制成的。 血液制品的种类 人血白蛋白 人胎盘血白蛋白 静脉注射用人免疫球蛋白 肌注人免疫球蛋白 组织胺人免疫球蛋白 特异性免疫球蛋白 主要方法 1 热处理方法 2 有机溶剂／去污剂法(S/D) 3 紫外线照射法 4 光化学病毒灭活法 5 其他方法 1 热处理方法 原理：使病毒外膜蛋白和衣壳蛋白变性，使病毒包膜上的糖蛋白棘突发生改变。从而阻止病毒吸附于宿主细胞。此外，热力也可破坏病毒复制时所需的酶类。 方法：干热处理、蒸汽加热处理、悬浮加热处理、巴斯德加热处理 各种热处理方法的比较 巴斯德加热处理法 1948年，巴斯德消毒法首先由Gellts 等在白蛋白的生产过程中应用，即将溶液状态的白蛋白经60℃10小时加热，乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和人免疫缺陷病毒(HIV)均可被灭活，临床应用及动物实验没有传播病毒性疾病的报道。 经巴斯德加热处理的人血白蛋白制剂在防止肝炎传播方面早有良好的记录 这几种方法中，用巴斯德消毒法(60℃，10h)处理液体状态的血制品效果较好。 灭活的同时会导致细胞成分发生变性和代谢破坏，不适合对全血和细胞成分的消毒 2 有机溶剂／去污剂(S／D)法 S／D法是由美国纽约血液中心于八十年代中期开发的病毒灭活方法，自1985年该技术获得FDA认可在美国获准使用以来，迄今已在世界上多个国家和多种血液制品中得到推广，具有良好的应用前景。 其机制就是利用化学试剂破坏脂包膜病毒外膜结构的完整性或靶细胞受体识别位点，使其失去传染性或复制能力。 用1% 3-正丁基磷酸盐( Tri-n-butyl phsophate, TNBP)TNBP加1% Triton X- 100 在30℃处理血浆4 h。 处理后的血浆按每200 ml 分装, 于-30℃保存2年, 血浆蛋白的活性仍保持良好,凝血因子也未见被激活。 S／D法的优点：对脂包膜病毒特别有效，且具有不会使蛋白变性，较高的制品回收率，所应用设备简单等。 S／D法的缺点：据报道, 经其处理的血制品仍可引起使用者发生细小病毒B18 和HAV 感染。 将S/ D 法与巴氏消毒法( 60℃, 10 h) 联用, 因巴氏消毒法可灭活蛋白包膜病毒而克服以上缺点。 3 紫外线照射法 紫外线(UV) 因其良好的杀菌作用, 能刺激血液中免疫成分的活性, 对蛋白质损害轻微, 早在四十年代即曾用于血液制品净化。 UV一方面可使核酸突变, 阻碍其复制、转录封锁及蛋白质的合成; 另一方面, 产生的自由基可引起氨基酸光电离, 从而导致细胞死亡 。 UV灭活的优点：UV消毒血液制品时,灭活病毒效果好, 特别是对抗力较强的无脂质包膜和耐热病毒, 而对血液成分活性的破坏亦并不严重。 UV消毒的缺点：经紫外线照射的病毒具有在可见光照射下重新复性的可能，若紫外线与一些化学光敏剂联合使用，则可提高其破坏病毒核酸的作用。 4 光化学病毒灭活法 利用光敏剂杀灭病毒，主要是依靠光敏剂在光照下产生的单线态氧或自由基氧化损伤病毒的分子结构，从而杀灭病毒。 根据光敏剂灭活病毒的机理和靶点不同可分为三类：以膜为靶点的光敏剂 、以核酸为靶点的光敏剂 、多靶点的光敏剂 各种光敏剂的比较 4.1 亚甲蓝／光化学法病毒灭活 使用无菌技术连接血浆袋和亚甲监光照袋，将溶入亚甲蓝的血浆收集到光照袋后放入4±2℃ 医用病毒灭活箱，100份血浆加入亚甲蓝后含量为0.93～3.13μmol／L(1.28±0.30μmol／L)，其中4份容量为260～280 ml血浆加入亚甲蓝后浓度<1 μmol／L，经荧光(30000lux)照射35 min，用过滤器过滤血浆，经滤过后亚甲蓝残留量为0.07～0.62μmol／L(0.23±0.12mol／L)，绝对残留量为0 .014～0.146μmol(0.005±0.026 μmo1)。 病毒灭活效果的测定 采用口炎疱疹病毒(VSV)和Sindbis病毒作为指示病毒，以细胞病变法检测灭活前后病毒滴度检测，vero细胞作为指示细胞，病毒滴度按Karber法计算。 Sindhis病毒和VSV病毒灭活前病毒滴度(1gTCID50)均为6.0，灭活后均为0.5，病毒降低量>4，病毒灭活效果符合国家规定要求 血浆主要成分分析 在制备前随机抽取100份血浆，血浆量为200～280 ml，设亚甲蓝灭活病毒前组及亚甲蓝灭活病毒后组，分别对血浆主要成分进行下列成份测定：纤维蛋白原、总蛋白、白蛋白、血浆Ⅷ因子。 不同的灭活条件，其灭活效果不同。 黄庆等以MB为光敏剂，以登革热病毒为指示病毒，以单波长点阵