神经束路电镜追并踪中影响HRP-TMB反应产物因素的分析.pdfVIP

维普资讯 ．f{：一 t；7，?) 动 物 学 研 究 1995，16 (2)：153一l60 CN 53～1040／Q ISSN 0254-5853 ZoologicalResearch 神经束路 电镜追踪 中影响HRP-TMB反应 产物因素的分析 俞发荣 兰州 医学院 7300~0) cc 3 茎墨一霞、／俞发宏 徐 林 彭沿平 (中国科学院昆明曲物研究所 650223) 摘要 采用 HRP TMB ST浩，对小鼠延髓 下橄榄桉 下端外侧网状桉细胞的 HRP—TMB 反应产物影 响 因素分析表 明： (1)较 高 的 pH 值 (7．0以上)是反应产物 消 失 的关键 因素 } 02mol／LPB，pH5O一6．0对 HRP—TMB反应灵敏度、反应产物的稳定性厦组织超微结构的 保存是适宜的} 当pH 值相同时，缓冲液浓度币间，反应产物消失的程度和速度也不相同。(2) 酒精有稳定反应产物 的作用。(3)反应前的预浸、灌注液的成分、浓度和固定时间等则与反应产 物的丢失无关。此外，用 pH55和 pH7．0的缓冲液处理的切片经 DAB强化、锻化后，组织的 超微结构无明显的差异。 f 关键词 HRP，TMB，酒精，酸碱度， 经束劂电镜追踪 ‘——一 —一 — — — — ———一1 ———— 一 i HRP(horseradishperoxidase)成 色 方 法有 联 苯 胺 法 (Mesulam， 1976)、DAB (diaminobenzi—dine)法 (Graham 等 ， 1966)、 甲 苯 酚 一DAB 法 (Streit等 ， 1977)、 CoCI2-DAB法 (Adams，1977)、邻～联茴香胺法 (Edwards等，1979)、TMB(tetramethyl benzidine)法(Mesulam，1978；Fujii，1984~顾耀铭，1991)。而在神经束路的电镜 追踪 中， 目前采用顾耀铭等 (1991)HRP—TMB成色法。该方法虽有较其它成色法反应灵敏的 一 面，但 HRP—TMB反应产物经 DAB后加强，锻化过程 中仍发生反应产物的部分或垒 部丢失。张建华 (1987)和顾攉铭(1991)等虽采取 了一些改 良措施 ，效果仍不太满意。在不 影响组织超微结构的前提下，力求减少和防止反应产物的丢失仍是 目前神经束路电镜追踪 中急待解决的问题。本研究在前人工作的基础上，改进 了实验方法和实验条件，找出了影 响 HRP～TMB反应 的主要 因素 ，达到减少和 防止反应产物的丢失，增强锇化反应 的 目 的，从而提高 了实验结果的可靠性。 l 材料和 方法 材料 ：小 白鼠 60只。 方法 ：用氯胺酮腹腔麻醉小鼠，在直视下用微量注射器将 10％一 3O％HRP盐 水 奉文 1994年 5月 I2日收到，同年 11月 10日修 回 维普资讯 54 动 物 学 研 究 16卷 注：@为预浸 20rain后和 H2O2反应，0为不预浸即和 H202反应 。 表 2 不同pH值