专10血脂及血浆脂蛋白检验新.pptVIP

三、血清（浆）总胆固醇测定 化学法 酶法 （一）化学测定法 化学测定法通常需抽提纯化。显色剂主要有两类： ①醋酸-醋酐-硫酸 ②高铁硫酸。 这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确 测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操 作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。 特点： 1．Liberman-Burchard反应 1885年Liberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，1890年Burchard用此反应测定胆固醇称为L-B反应。 1953年Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，称为Zak反应。 2．Zak反应 (二)酶测定法 特点： 常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，既可以手工操作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了不同程度的基质效应。 采用酶反应原理的干化学法颇为实用，其缺点是价格高，精密度差。胆固醇的酶测定法始于70年代。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固醇的主要方法。 CEH-COD-PAP法 原理： CE＋H2O FC＋FFA FC＋O2 △4-胆甾烯酮＋H2O2 H2O2＋4-AAP＋酚 醌亚胺＋H2O 胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和4-氨基安替比林外，还有维持pH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来 评价： 主要缺点是： 优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。 ①某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机 溶剂配制的溶液作为TC分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准， 此校准液（品）相当于三级标准。 ②表面活性剂，如吐温-40可以干扰胆固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇6000 可使结果提高1％～2％； ③本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。 【参考值】 血清总胆固醇合适范围： ≤5.20mmol/L (200mg/dl)， 边缘升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dl)， 升高：≥5.72mmol/L (220mg/dl)。 影响TC水平的因素 ①年龄与性别； ②长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高； ③遗传因素； ④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。 TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，TC是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈正相关。 【临床意义】 高TC血症：原发和继发 低TC血症：原发和继发 三、血清（浆）甘油三酯测定 化学法 酶法 基本操作： （一）化学测定法 1、抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷 脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。 2、皂化：甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOH作皂化剂 3、氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4、显色：甲醛的定量主要有两种方法： ①甲醛与变色酸(4，5-二羟-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物 ②甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶 (二)酶测定法 1、磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法） 原理 TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP G-3-P + O2 GPO 磷酸二羟丙酮 + H2O2 2 H2O2 + Phenol + 4-Aminoantipyrine POD Chromogen + 4H2O 计算 TG（mmol/L）=A500nm测定/A500nm校准 ? 校准血清TG浓度（mmol/L） 去除FG干扰可用下列方法： 1、外空白法：同时用不含LPL的酶试剂测定游离甘油（FG）作空白。 2、内空白法：又称两步法或双试剂法—将LPL和4-AAP组成试剂2，其余部分为试剂1。此法目前为中华医学会检验分会推荐方法。 2．乳酸脱氢酶法 原理： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸