化脓性链球菌溶血素o活性结构重组蛋白的制备.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（６）：５１５６ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 化脓性链球菌溶血素Ｏ活性结构重组蛋白的制备 杨思源　潘敬梅　王　硕　邓开轩　邓　强　黄新河　李学如 （西南交通大学生命科学与工程学院　成都　６１００３１） 摘要　生物信息分析化脓性链球菌溶血素Ｏ（ｓｔｒｅｐｔｏｌｙｓｉｎＯ，Ｓｌｏ）蛋白结构表明，Ｓｌｏ蛋白除含有由 ４６１氨基酸残基组成的溶血活性结构域 Ｔｈｉｏｌ＿ｃｙｔｏｌｙｓｉｎ外，在 Ｎ端还有一跨膜结构域。利用 ｐＥＴ１０１ＧＥＮＥ蛋白表达系统，成功构建出表达具有Ｓｌｏ活性重组蛋白的重组子，采用镍柱亲和层 析分离技术，纯化目的蛋白；纯化蛋白ＳＤＳＰＡＧＥ检测分析表明，重组蛋白与预测的溶血活性结构 域的分子量相一致；溶血实验显示，纯化重组蛋白具有溶血活性。以纯化的重组蛋白为免疫原， 对大鼠进行４次免疫，所获得免疫血清经Ｅｌｉｓａ检测，抗Ｓｌｏ血清效价达到 １∶１２８００；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 检测猪链球菌、马链球菌和化脓性链球菌中的链球菌溶血素结果显示，抗Ｓｌｏ多克隆抗体仅能与 化脓性链球菌溶血素Ｏ发生反应，表明研究制备的化脓性链球菌溶血素Ｏ活性结构重组蛋白抗 原具有较好的特异性，所制备的抗原Ｓｌｏ可用于进一步开发抗链球菌溶血素Ｏ（ＡＳＯ）试剂盒。 关键词　化脓性链球菌　链球菌溶血素Ｏ重组蛋白　多克隆抗体 中图分类号　Ｑ８１２　Ｒ３７８．１２　Ｒ３９２ 　　化脓性链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ）又称Ａ族链 对细胞产生毒性作用［７］，因此，Ｓｌｏ被认为是一种重要 球菌（ＧｒｏｕｐＡＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ，ＧＡＳ），是一种可引起从普通 ［８］ 的外毒素 。此外，Ｓｌｏ具有极强的抗原性，感染化脓 非侵袭性疾病如咽炎、猩红热、脓疱病到侵袭性和严重 性链球菌后２～３周内，８５％以上病人会产生Ｓｌｏ抗体， 侵袭性疾病如风湿热、链球菌感染性肾小球肾炎、坏死 病愈后可持续数月甚至数年；并且，在风湿热、强直性 性筋膜炎、中毒休克综合征等疾病的常见人类专性致 脊柱炎等疾病患者血清中也存在较高滴度Ｓｌｏ抗体，血 ［１］ 清中抗链球菌溶血素Ｏ（ａｎｔｉｓｔｒｅｐｔｏｌｙｓｉｎＯ，ＡＳＯ）的测 病菌 。在链球菌感染的疾病中，约９０％是由ＧＡＳ引 ［２］ 定可广泛应用于与链球菌感染有关的疾病如肾小球肾 起的 。据统计，全球每年由ＧＡＳ感染所引起的急性 咽炎和皮肤病高达８亿多例，而至少有５１．７万人死于 炎、猩红热、扁桃体炎、风湿热及链球菌感染后反应性 ［９１０］ ＧＡＳ感染引起的严重疾病，ＧＡＳ感染与并发症一直是 关节炎等的诊断中 。制备有效的检测患者血清中 ［３］ Ｓｌｏ抗体的Ｓｌｏ抗原，对于鉴别诊断链球菌感染相关疾 困扰公共健康的严重问题 。调查显示，ＧＡＳ感染流 ［４］ 病以及疗效评价具有重要价值。 行周期约３～５年 ，因此，加强对 ＧＡＳ致病机理与诊 断的研究，对于预防与治疗 ＧＡＳ感染具有非常重要的 １　材料与方法 ［５６］ 积极意义 。 １．１　材料与试剂 　　ＧＡＳ感染及感染后的变态反应与多种毒力因子有 １．１．１　菌株、质粒　实验所用菌株化脓性链球菌 关，其中ＧＡＳ产生的链球菌溶血素 Ｏ（ｓｔｒｅｐｔｏｌｙｓｉｎＯ，