二、动物细胞融合与单克隆抗体(上传).pptVIP

植物细胞杂交技术 的过程是怎样的？ 提问 ？ 植物体细胞杂交过程示意图 植物A细胞 植物B细胞 去 壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 融合体 再生壁 杂 种 细 胞 愈 伤 组 织 杂 种 植 株 细 胞 融 合 植物组织培养 方 法 : 物理法：电刺激等 化学法：聚乙二醇 生物法：灭活仙台病毒 动物细胞融合基本原理及方法 基本原理: 细胞膜的流动性 1.为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 2.不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 思 考 题： 灭活的病毒诱导动物细胞融合过程： 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 灭活的病毒使细胞膜上蛋白质和脂质重新排布，细胞膜打开 被融合细胞的细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 灭活的病毒使细胞膜上蛋白质和脂质重新排布，细胞膜打开 生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌 — 鸡 原生质体 — 血红细胞 1975年 人 — 胡萝卜 腹水癌细胞 — 原生质体 1976年 人 — 小鼠纤 维肉瘤细胞 — 畸胎瘤细胞 1978年 动物细胞融合已成功的实例 思考题： 1. 传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 2. B淋巴细胞产生抗体有何特点？ 单克隆抗体的概念： 通过用单个的B淋巴细胞克隆形成细胞群，由这些细胞产生出化学性质单一、特异性强的抗体，即为单克隆抗体。 要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞 结 论： 探索原因： 动物体内经免疫反应产生的抗体可多达百万种以上 每一个B细胞只分泌一种特异性抗体 新 难 题： 在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的 制备单克隆抗体的技术 获新技术： 将淋巴B细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，进而获得大量特异性强的抗体 奇思妙想： 难 题： 医疗实践中遇到的难题 抗体的特异性差 获得大量抗体困难 纯度低 制备单克隆抗体新技术的获得过程： 思考题： 1. 把B细胞和骨髓瘤细胞放在一起时，会有 几种融合方式？ 2. 经诱导细胞融合处理后，共有几种细胞？ 3. 怎样筛选出杂交瘤细胞？ 4. 怎样获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞？ 5. 怎样利用杂交瘤细胞来生产抗体？ 制备单克隆抗体流程图 获取B淋巴细胞和骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养、筛选 产生特定抗体杂交瘤细胞 大量单克隆抗体 生产抗体 步骤： 未融合的骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 B-B杂交细胞 未融合的B细胞 骨髓瘤-骨髓瘤杂交细胞 融合的结果： 1. 把B细胞和骨髓瘤细胞放在一起时， 会有几种融合方式？ 2. 经诱导细胞融合处理后，一般共有 几种细胞？ 怎样筛选出杂交瘤细胞？ 怎样获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞？ 选择培养基筛选法： 1.HAT培养基： H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤。 A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成主要途径。 T(Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成DNA。 2.HAT选择作用： 淋巴细胞、骨髓瘤细胞和融合的具有同种核的细胞：不能生长，都会死亡。 　　杂交瘤细胞:不会死亡、都能生长。 常用“有限稀释法”来选择：将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每个孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔中的细胞继续进行有限稀释，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。 怎样利用杂交瘤细胞来生产抗体？ 制备单克隆抗体流程 动物免疫 分离脾细胞 制备骨髓瘤细胞 细胞融合 HAT培养基选择杂交瘤细胞 阳性孔克隆化并扩大培养 再次克隆 克隆扩大培养 扩大培养收集上清液 动物接种收集腹水 单克隆抗体纯化保存 ELISA测血清 单克隆抗体的概念： 通过用单个的杂交瘤细胞克隆形成细胞群，由这些细胞产生出化学性质单一、特异性强的抗体，即为单克隆抗体。 单克隆抗体的有关应用 ⑴作为诊断试剂： 准确识别各种抗原物质，与抗原的特异性结合具有准确、高效、简易、快速的特点。 ⑵用于治疗疾病和运载药物： 主要用于治疗癌症。单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。 二、动物细胞融合与单克隆抗体 （一）动物细胞融合 （二）单克隆抗体 1.概念　 2.基本原理和方法 3.过程 4.意义和应用 1.单克隆抗体的概念