藏药绿萝花水提物对成纤维细胞线粒体抗氧化作用的研究.pdfVIP

动物医学进展 。2017，38(2)：55—59 ProgressinVeterinaryM edicine 藏药绿萝花水提物对成纤维细胞线粒体抗氧化作用的研究 韩金潭 ，孙翠翠 ，丁淑梅 ，顾 员印 ，刘 群 (1．西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041；2．四川金科药业有限公司，四川成都 610100) 摘 要：为探讨不同浓度的绿萝花制剂对线粒体的抗氧化作用及毒理作用，以小鼠胚胎成纤维细胞及其 线粒体为研究对象，在最大无毒作用浓度 (TC。)的基础上设计 3个浓度药物组，在 TC。下设计 6个浓度药物 组 ，以成纤维细胞线粒体膜 电位 (MMP)和线粒体总活性氧含量 (ROS)为检测指标 ，在 4个不同作用时间点， 研究绿萝花对成纤维细胞线粒体 的影响。结果表 明，绿萝花制剂对 鼠胚成纤维细胞 (MEF)的TC。为 o．25g／mL，但 ROs已急剧上升 ，MMP下降；绿萝花浓度为 0．03g／mL时，抗氧化能力最强 ，随着浓度的上 升 (O．03g／mL~0．25g／mL)，线粒体抗氧化能力减弱或消失；随着给药浓度的升 高，细胞凋亡现 象出现趋势 明显，浓度高于TC。时，表现出毒性作用，浓度升高，毒性增大。绿萝花干膏制剂 0．03g／mL(以生药含量计 算)具有抵抗 由H。O 引起 的MEF线粒体MMP下降和 ROs的升高的功能，表现 出一定的抗氧化能力和阻 滞细胞凋亡发生的作用 ；TC。及之上浓度具有细胞毒性作用。 关键词 ：绿萝花 ；成纤维细胞 ；线粒体；膜电位 ；活性氧 中图分类号 ：$859．7 文献标识码 ：A 文章编号 ：1。07—5O38(2O17)02—0055—05 藏药绿萝花为天南星科喜林芋属植物绿萝花的 燥花蕾，由四川宇妥藏药药业有限责任公司提供 ，由 干燥花蕾，为西藏特有 的二级保护珍贵药材 ，民间习 西南大学园艺园林学院鉴定(鉴定人 ：李先源)，室温 以泡水饮用 ，用以糖尿病、高血压 、高血脂 、冠心病及 密封干燥保存 。 各种血管脉管炎症等的防治。目前关于绿萝花的研 1．1．3 试剂与仪器 细胞存活率、线粒体膜 电位检 究报道较少，仅局 限于几种化学成分提取工艺研 测试剂盒 ，上海碧云天生物科技有 限公司产品产 品； 究[1；药理研究表 明绿萝花具有增强机体对糖 的耐 BB15型 Co2培养箱 ，THERMO公司产品；IXT1型 受能力、抑制机体对葡萄糖的吸收_2伽；降低糖尿病 倒置显微镜 ，oLYMPUS公司产 品；DU800型荧光 大鼠血糖含量 ，改善高血糖脂模型大鼠血糖 、血清总 分光光度计 ，BECKMAN公司产品。 胆 固醇、低密度脂蛋 白、动脉粥样硬化指数 的异常 ， 1．2 方法 降低空腹血糖指标、升高胰岛素含量等作用 ；增 1．2．1 绿萝花干膏制剂的制备 参照康莲莲_】等 强机体免疫功能和抗肿瘤生长的作用 ；增强机体 水提工艺制备绿萝花于膏制剂 ：浸泡 0．5h、20倍加 水量 、1h煎煮时间、煎煮 3次 ，制备干膏剂，干膏得 组织器官抗氧化能力的作用_7。 。本研究以小 鼠胚 率 23．2％，4℃冰箱保存。PBS缓冲液制成相 当于 胎成纤维细胞及其线粒体为研究对象，在最大无毒 生药 100 浓度的绿萝花干膏制剂溶液 ，现配现用 。 浓度基础上下设计不 同浓度药物组 ，以成纤维细胞 1．2．2 TC。测 定 先进行 鼠胚成纤维细胞 (MEF) 线粒 体膜 电位 (MMP)和线粒体总活性 氧含量 的制备及培养 ，当MEF传代培养 3次后进行计数并 (ROS)为检测指标，在不同作用时间点，研究绿萝花 稀释到细胞量约为 4×10。个 ／mL--6×10个