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小球藻适宜碳源和营养方式探究 　　摘要：筛选小球藻（Chlorella sp.）的适宜碳源，比较研究小球藻在不同营养方式下的生长情况。结果表明，葡萄糖能显著促进小球藻生长，且小球藻可利用葡萄糖在化能异养、光激活异养、光异养及兼养条件下均可生长，其比生长速率从大到小依次为：兼养、光异养、光激活异养、化能异养及光合自养。兼养培养比生长速率接近于光合自养和光异养培养下的比生长速率之和。 关键词：小球藻（Chlorella sp.）；微藻；适宜碳源；异养；兼养 中图分类号：S968；Q949.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）24-6030-04 随着化石燃料的日益枯竭，现代社会依靠化石燃料的现状遭到了严重的挑战[1]。依照人类对化石燃料的消耗速率和现已探明的地球化石燃料储量，化石燃料可能在未来50年消耗殆尽。因此，探寻可再生能源已迫在眉睫。生物柴油被认为是最有望代替化石燃料的可再生能源[2，3]。由于传统的植物油和动物脂肪的短缺，不能满足生物柴油生产的原料供给[4]，微藻以其高生长速率、高油脂产率和生长空间广阔等优势被认为是最具潜力的生物柴油原料[5]。然而在微藻自养培养生产生物柴油的过程中也遇到了瓶颈问题。微藻在光合自养（Photoautotrophy）条件下生长速度缓慢，藻液浓度低，增加了微藻采收的成本[6]，使微藻制生物柴油用于商业生产的经济可行性很低[7]。解决这一问题的方法之一是在自养培养基中添加外加碳源，使微藻利用外加碳源进行异养（Heterotrophy）或兼养（Mixotrophy）生长。 与高等植物相比，微藻不仅可以利用光能和CO2进行光合自养生长，而且可以利用外加碳源进行异养和兼养生长。光合自养的光抑制性是限制微藻生物量增加的主要原因，异养培养以外加碳为碳源和能源[8]，能够降低光合自养培养的不足。Zheng等[9]通过异养培养Chlorella sorokiniana所得微藻细胞浓度是自养培养的3.3倍。异养培养和兼养培养不仅能提高微藻的生物量，还可以改变其油脂含量[10]，缪晓玲等[11]通过异养转化细胞工程技术获得了油脂含量高达57.9%的异养小球藻，使油脂含量在光合自养的基础上提高了4倍。 小球藻（Chlorella sp.）为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻，是一种球形单细胞淡水微藻。目前，用于产油制生物柴油的小球藻主要有原始小球藻（Chlorella protothecoides）和普通小球藻（Chlorella vulgaris）等，关于小球藻培养的研究报道主要集中在自养培养和异养培养方面[12-14]，但对小球藻的自养、化能异养（Chemoheterotrophy）、光激活异养 （Light-activated heterotrophic growth，LAHG）、光异养（Photoheterotrophy）和兼养培养的系统比较研究报道较少。本研究对小球藻适宜碳源和其营养方式进行了比较试验，以期得到高密度培养小球藻的适宜培养方式，为微藻炼制生物质燃料以及充分利用这一资源的其他领域提供相关数据。 1 材料与方法 1.1 藻种 小球藻购自中国科学院水生生物研究所淡水藻种库。 1.2 培养基与试剂 SE基础培养液（1 L）： NaNO3 250 mg， K2HPO4 75 mg， MgSO4·7H2O 75 mg， CaCl2·2H2O 25 mg， KH2PO4 175 mg， NaCl 25 mg， FeCl3·6H2O 5 mg， EDTA-Fe 1 mL， Trace mental solution 1 mL， 土壤提取液 40 mL， 蒸馏水958 mL。 试剂： 葡萄糖，丙酮酸钠，乙酸钠，碳酸氢钠，碳酸钠，3-（3，4-二氯苯基）-1，1-二甲脲（DCMU，购于Sigma公司），头孢噻肟钠。 1.3 培养条件 将配制分装好的培养基在高压灭菌锅中121 ℃灭菌20 min，灭菌后冷却至室温，添加头孢噻肟钠至0.5 g/L防止染菌。在超净台中将生长至对数期的微藻接种于含150 mL培养基的250 mL锥形瓶中（接种量20% V/V）于温度30 ℃、平均光照度5 000 lx的培养箱中培养，光暗比12 h∶12 h。 1.4 试验设计 1.4.1 小球藻适宜碳源选择 选取葡萄糖、丙酮酸钠、乙酸钠、碳酸氢钠和碳酸钠作为小球藻的外加碳源，外加碳源浓度为0.1 g/L（按碳含量计，本试验所添加的碳源浓度均以碳含量计。下同），每组设3个平行试验，进行兼养培养。每隔24 h测定其生物量。 1.4.2 小球藻培养方式选择 光合自养培养：将微藻接种于SE基础培养基中，在光照条件下培养。设置3个