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猪促卵泡激素β亚基基因克隆及表达研究-生物化工专业毕业论文.pdf 31页

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摘 要 促卵泡激素 (Follic土eStimulatinghormone,FSH)是动物垂体前叶分泌 的一种促性腺激素,属于糖蛋白激素家族。促卵泡激素在垂体中含量最少,最不 稳定,但却具有极其重要的生理功能。 促卵泡激素由a、D两个糖基化亚基组成。一般认为 a亚基具有负责信弓 转录的作用,而 日亚基是功能亚基,参与受体结合,激素生理作用的特异性是 由a亚基所决定的。 本论文是国家自然科学基金项目“猪促卵泡激素基因表达及调控研究”中的 部分内容,主要工作是从猪脑垂体中提取总RNA后,利用SmartcDNIA试剂盒合 成猪促卵泡激素已亚基cD\'A,去除自身的信号肤序列后,将其克隆于质粒P尸工C9K 中,电转化毕赤酵母,Southern-blot检测结果表明 R亚基基囚已经整合到酵 母染色体上;工程菌在发酵过程中用甲醇进行诱导表达,将上清液进行SDS 及Western-blot分析,结果表明构建的工程菌能够产生有免疫学活性的猪促卵 泡激素 0亚基。 国内利用生物技术表达猪促卵泡激素的研究只有我所在进行,并且在以前的 工作中已取得了一定突破,本项目为使猪促卵泡激素的工业化生产奠定基础。 关键词:猪促卵泡激素d亚基,PichiaPastoris甲醇酵母,基因表达 ABSTRCT Folliclestimulatinghormone(FSH)belongstothefamilyofglycoprotein hormonessecretedbytheanteriorpituitary.ThoughthecontentofFSH inpituitaryis leastandthestructureismostunstable,ithasveryimportantphysiologyfunction. FSHisaheterodimercomposedofanasubunit,whichisinchargeoftranscriptof signal,andapsubunit,whichisthefunctionalsubunitandcanintegratewiththe receptor.TherecombinantFSH(rFSH),whichwasproducedbygeneengineered technique,istotallyassameasthenatureFSH. ThisthesisisapartoftheNationalNatureScienceFunditem`StudyofGene ExpressionandRegulateofPorceFSH'.Firstly,thetotalRNAwasextractedfrom porcepituitary.ThenthepFSHpsubunitcDNAwassynthesisbytheSmartcDNA synthesiskit.ThecDNAwasthenclonedinthechromosomeofPichiaPastoris, whichwastestedbytheSouthern-blot. TherecombinantwasinducedtoexpresspFSHpsubunitprotein,whichwastestedby SDSandWestern-blot.Itshowedthattherecombinantcansecretethep subunitwhichhadimmunologicalactivity. ThistechniquewasreportedonlybyourinstitutioninChina.Ourstudywillmakethe productionof印FSHpossible Keywords:pFSHpsubunit,PichiaPastoris,geneexpression 南京工业人学硕士学位论天 第1章 文献综述 1.1促卵泡激素研究进展 1.1.1促卵泡激素 (FollicStimulatinghormone,FSH)简介 促卵泡激素足动物垂体前叶分泌的 种促性腺激素:’已同垂体分泌的捉甲状 腺素 (TSH)、促黄体激素 (LH),胎盘分泌的绒毛促性NI!素 (CG),共同组成 -

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